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乳酸杆菌食品级表达系统的构建与鉴定
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2008 14 4 ): 566~570 2008 08 25
应用与环境生物学报 ， (
Chin J Appl Environ Biol=ISSN 1006-687X DOI: 10.3724/SP.J.1145.2008.00566
乳酸杆菌食品级表达系统的构建与鉴定
*
肖 薇 张义正
(四川大学生命科学学院教育部资源生物学与生态环境重点实验室，四川省分子生物学与生物技术重点实验室 成都 610064)
摘 要 以LacFacF 为选择标记，构建了乳杆菌食品级表达系统 �� 首先克隆了Latobacillus caseicaseicaseiA�CC393乳糖操作子LacF
和LacG基因片段，将LacF 克隆至载体�RV300上后，利用�4DNA 聚合酶消除了LacF片段的Sph Ⅰ�� 点，构建了点，构建了LacF 基因
编码区移码突变的质粒�RV△lacf，随后将LacG片段与质粒�RV△lacf连接后获得了质粒�RVgg△lacf�� 同时将没有移码突
变的LacF 和LacG基因片段克隆至载体�RV300上，构建了整合型载体�RVgf�� 将质粒�RVg △lacf 电导入L . caseicaseicasei A�CC393
中，筛选到不能在乳糖平板上生长的突变菌株�� 经���分析表明，该菌株的LacF基因被移码突变基因Lac △F所取代，
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命名为L . caseicaseicasei MBL25 (((LacFF )���� 为了鉴定此系统的可行性，将豆豉溶栓酶基因成熟肽编码片段插入到整合型载体�RVgf
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中，成功构建了质粒�RVgf--badfebadfebadfe ，将其导入L . caseicaseicasei MBL25 (LacFF )后，筛选LacFF 菌株 �� ������分析结果显示，豆豉溶栓酶
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基因已经整合到L . caseicaseicasei染色体中并且表型已经得到恢复 �� 表明MBL25(LacFF )中LacFacF基
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