肝癌及癌周组织核转录因子κB表达免疫组织化学分析.docVIP

肝癌及癌周组织核转录因子κB表达免疫组织化学分析 　　【摘要】目的：研究核转录因子（NF）-κB在肝癌和癌周组织中的表达及其临床病理学关系。方法：以自身配对法分别收集经手术切除患者的肝癌及其癌周组织各35份，以免疫组化染色法检测肝癌及其癌周组织NF-κB表达、胞内分布，以及病理学特征。结果：NF-κB阳性表达物呈棕黄色颗粒状染色，癌组织中NF-κB点灶状表达，定位于胞浆和细胞核；而癌周组织NF-κB阳性表达主要定位于胞浆，未见细胞核阳性。定性观察肝癌组织中NF-κB表达强度明显高于癌周组织，癌组织NF-κB表达阳性率为100%，癌周组织为68.6%，二者比较差异有非常显著性（χ2=13.1，P＜0.01）。肝癌组织中NF-κB的表达强度与分化程度、肿瘤数目、HBsAg和肿瘤直径无关。结论：肝癌组织中NF-κB过表达，与肝癌的发生、发展密切相关。 　　【关键词】癌；肝细胞；NF-κB；免疫组织化学；表达 　　文章编号：1009-5519（2008）12-1746-03 中图分类号：R73 文献标识码：A 　　 　　核转录因子（NF）-κB是与免疫球蛋白κ轻链增强子B区结合，具有和某些基因上启动子区固定核苷酸序列结合而启动该基因转录的蛋白质。NF-κB是具有多向性调节作用的核转录因子，可调控多种基因(免疫、炎症反应、病毒和原癌基因)的转录表达[1]。激活的NF-κB参与癌症的启动、发生及发展过程，在炎症性相关的肝癌（HCC）发生发展中呈高表达，在肝细胞炎症与癌变间起桥梁作用，其中包括肝脏免疫炎症反应相关基因、肝炎病毒相关基因和原癌基因的转录表达。在肝癌组织中异常激活，可抑制细胞凋亡，促进肝细胞存活，与肝癌的发生发展密切相关[2]。本文采用免疫组织化学方法，分析了按自身配对法留取的肝癌患者术后肝癌的癌灶组织和癌周组织标本中NF-κB表达、胞内分布及其临床病理特征。 　　 　　1 材料和方法 　　 　　1.1 研究对象：于2005～2007年间，按自身配对法收取南通大学附属医院原发性肝癌患者35例(男29例，女6例)术后新鲜肝脏组织，分别留取肝癌切除后的癌灶组织、癌周组织(距癌灶边缘5 cm)各35份(每份约200 mg)，除部分作组织病理学检查外，其余置组织-85℃保存。35份标本中肝癌肿块直径≥5 cm 7例，5 cm 28例（其中3.0 cm肝癌18例)，年龄35~69岁，平均(50.9±9.8)岁。35例标本已经组织病理学(HE染色)证实其类型均为肝细胞肝癌，其中高分化、中分化和低分化分别为7例、22例及6例；肿瘤单发30例，≥2个5例。所有病例均有完整随访资料，按全国肝癌防治协作组制定的标准核实诊断。 　　1.2 试剂与标本切片：兔抗人NF-κB多克隆抗体及S-P免疫组化试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。新鲜肝组织标本经取材，以10％中性福尔马林固定，石蜡包埋，制成厚度4 μm的组织切片。 　　1.3 免疫组织化学分析NF-κB（S-P法）：NF-κB在癌组织和癌周组织中的表达均采用免疫组织化学S-P法。4 μm厚的组织切片按常规脱蜡、水化；双氧水阻断内源性过氧化物酶；高压加热法修复抗原；正常动物血清封闭非特异性结合；滴加NF-κB抗体，4 ℃过夜，磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗；滴加生物素标记的第二抗体，室温孵育10 min，PBS漂洗；滴加链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶，室温孵育10 min，PBS冲洗；滴加新鲜配制的四盐酸二氨基联苯胺(DAB)溶液，室温显色，蒸馏水洗涤；苏木素复染。无水乙醇脱水透明、封片。OLYMPUS BX 50光学显微镜观察、摄像。以0.01 mol/L PBS液(pH=7.5)分别替代一抗、二抗和SP试剂作阴性对照，已知表达NF-κB的肝癌组织作阳性对照。 　　1.4 NF-κB判断标准：肝组织中NF-κB表达强度，以阳性细胞数≥10%作为阳性判断标准，进而根据阳性细胞百分率分为NF-κB表达弱阳性(+)：阳性细胞数为10%～25%；NF-κB表达阳性(++)：阳性细胞数为26%～75%；NF-κB表达强阳性(+++)：阳性细胞数75%。 　　1.5 统计学处理：以stata7.0统计软件分析和处理数据。计数资料以卡方检验或Fisher确切概率法分析和处理，以P0.05表示差异具有显著性。 　　 　　2 结果 　　 　　2.1 肝癌组织中NF-κB表达的胞内分布与定位：肝癌组织及其癌周组织中NF-κB阳性表达呈棕黄色。癌组织中NF-κB表达呈巢状分布，深染，细胞胞浆和细胞胞核均呈阳性；而它对应的癌周组织NF-κB阳性表达，主要定位于胞浆，而细胞核无明显的阳性着色。镜下定性观察肝癌组织中NF-κB表达强度明显高于癌周组织。 　　2.2 肝癌与癌周组织中NF-κ