肝癌中基质金属蛋白酶组织抑制因子1表达临床意义.docVIP

肝癌中基质金属蛋白酶组织抑制因子1表达临床意义 　　摘　要：目的研究肝癌组织基质金属蛋白酶组织抑制因子－1(TIMP－1)的表达，探讨其与肝癌的关系及其临床意义，为临床上寻找肝癌表达的新的生物学标志物提供理论依据。方法取山东省昌邑市人民医院2008年6月一2010年6月肝癌手术切除标本36例，按照Edmondson―Steiner组织学分级标准进行分级。选用3例外伤性肝破裂患者手术肝切除标本作正常对照。使用鼠抗人TIMP--1多克隆抗体，进行免疫组织化学PV―9000通用型二步法染色。染色结果根据反应强度及面积判断，评分标准按Shimizu方法，根据两项打分之和判断。结果对照组中TIMP―1的表达为阴性。TIMP--1在肝癌中的表达阳性率为74.8％。TIMP--1的阳性表达与患者年龄、性别、甲胎蛋白(AFP)是否阳性、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是否阳性均无关(均P0.05)。有癌栓组、无癌栓组和包膜不完整组、包膜完整组的TIMP--1在各组间差异均无统计学意义(均P0.05)。高侵袭转移组与低侵袭转移组间，TIMP--1阳性率分别为89.6％和48.3％，组间差异有统计学意义(P0.05)。结论TIMP--1在肝癌组织中的过度表达是肝癌侵袭与转移程度的一个重要生物学标志物。 　　关键词：肝癌；基质金属蛋白酶组织抑制因子-1；免疫组织化学 　　中图分类号：R735.7　文献标志码：A　文章编号：1672--4208(201I)02--0024--02 　　 　　肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，20世纪90年代以来，肝癌的发病率已上升至恶性肿瘤的第二位。近年来采取了以手术为主的综合治疗，由于局部复发或远处转移，肝细胞癌的死亡率仍居高不下，所以，寻找影响肝细胞癌浸润转移的多种因素对于提高疗效具有重要的指导作用。基质金属蛋白酶组织抑制因子－1(tissue inhibitors of metalloproteinase－1，TIMP－1)在肝癌发生发展中的作用，可以帮助阐明肝癌发生发展、转移的机制，寻找抗肿瘤侵袭、转移的治疗靶点。本实验采用免疫组织化学(免疫组化)PV－9000通用型二步法检测了我院2008年6月　20lO年6月期间36例肝细胞癌手术切除标本，初步探讨了TIMP－1与肝癌发生、生长及侵袭、转移的关系，为临床上寻找肝癌预后的新的生物学标志物提供理论依据。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1　一般资料　我院肝细胞癌手术切除标本36例，其中男24例，女12例。年龄19～72岁。血清甲胎蛋白(AFP)阳性者29例，占80.5％；乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性者24例，占67.0％；肿瘤直径≤5cm者14例，5cm者22例。按照Ed―mortdson―steiner组织学分级标准，Ⅰ级4例，Ⅱ级17例，Ⅲ级14例，Ⅳ级2例。有完整包膜者11例，包膜浸润、不完整和无包膜者25例。有癌栓者7例。所有病人术前均未行任何治疗。3例外伤性肝破裂患者手术肝切除标本，作正常对照。 　　1.2　试剂　PV―9000通用型二步法检测试剂盒，浓缩型鼠抗人单克隆抗体TIMP―1，试剂均购自武汉博士德生物技术有限公司。 　　1.3　实验方法将制作好的标本蜡块行5μm连续切片，分别行PV―9000通用型二步法免疫组化染色。用0.01％PBs代替一抗作为阴性对照，外伤性肝破裂患者手术肝切除标本作正常对照组。常规石蜡切片脱蜡入水，3％双氧水室温孵育5～10min，以消除内源性过氧化物酶的活性。蒸馏水冲洗，PBs浸泡5min，行电煮锅煮沸抗原修复法进行抗原修复。PBS液浸泡5min，甩去PBS液，滴加适当稀释好的一抗(浓缩型MMP-9稀释比例为1:50，浓缩型TIMP-1稀释比例为1:50)。37℃孵育1～2h或4℃过夜。PBS冲洗，2min×3次。滴加试剂1(po1ymet helper)，室温或37℃孵育20min，PBS冲洗，2min×3次。滴加试剂2(poly peroxidase―anti―mouse/rabbit IgG)，室温或37℃孵育20 min，PBs冲洗，2min×3次。滴加DAB显色剂显色3～8min。自来水充分冲洗，苏木素复染，脱水，透明，封片。 　　1.4　免疫组化高倍镜下(40×10)取10个不同视野，每个视野计数100个细胞TIMP－1，阳性标准为细胞胞浆出现黄色、棕黄色、棕褐色颗粒，染色强度高于背景非特异性染色为准。按阳性细胞所占百分比进行分析：(一)阳性细胞25％；(+)阳性细胞百分率25％～50％；(++)阳性细胞百分率50％～75％；(+++)阳性细胞百分率75％以上。 　　1.5　统计学处理应用SPSS 11.0统计软件包进行分析，所得计数资料用y2检验比较组间的差异。以P0.