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联合应用姜黄素与神经干细胞治疗脊髓损伤实验研究 　　【摘要】目的探讨联合应用姜黄素与神经干细胞治疗脊髓损伤的效果。方法选取30只成年Wistar大鼠，将模型动物随机分为三组：正常组、损伤组及联合移植组，每组10只。观察三组的BBB评分，诱发电位潜伏期及板试验角度值的变化。结果联合移植组的1，2，4，8周的BBB评分皆明显高于损伤组，两组比较差异有统计学意义（P0.05）。而两组的BBB评分显著低于正常组，差异有统计学意义（P0.05）。大鼠CSEP的波形为“W”形，所有大鼠在术前和正常组术后的潜伏期正常。4周后，联合移植组出现“W”形，但是诱发电位潜伏期明显延长，差异有统计学意义（P0.05）。自损伤后1周起，各时间点损伤组及联合移植组大鼠行斜板试验角度值均逐渐上升，联合移植组所测得角度值均大于单纯损伤组，差异有统计学意义（P0.05）。结论联合应用姜黄素与神经干细胞治疗脊髓损伤，可以激活Wnt/p-catenin信号通路使脊髓损伤后部分内源性神经干细胞向神经元方向分化，减轻胶质瘢痕，从而改善大鼠后肢功能的恢复。 　　【关键词】姜黄素；神经干细胞；治疗；脊髓损伤；联合应用；临床疗效 　　【中图分类号】R651.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-0616（2015）21-30-04 　　脊髓损伤（spinal cotd injury，SCI）是一种严重的中枢神经系统（central nervous system，CNS）创伤，目前尚无有效的治疗手段。传统观念认为，困扰脊髓损伤后神经功能修复的关键问题是损伤的神经组织及细胞无法再生。干细胞的发现使中枢神经系统损伤的研究进入了新的领域。目前，SCI后的细胞替代治疗已成为神经功能修复的热点问题。常用的方法有外源性干细胞移植与激活并诱导内源性神经干细胞（endogenous neural stemcells，ENSCs），与外源性干细胞移植相比，激活并诱导内源性神经干细胞来修复脊髓损伤，不存在安全及伦理问题，其新生的神经组织细胞在与机体整合上具有同源性，不存在排斥反应。本研究通过联合应用姜黄素与神经干细胞干预大鼠脊髓挫伤模型，观察损伤后大鼠神经功能修复情况，分析其效果，现报道如下。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 　　30只成年Wistar大鼠，体重（250.0±50.0）g，雌雄不拘，合格证由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。将模型动物随机分为三组：正常组、损伤组及联合移植组，每组10只。三组月龄、体重等一般资料比饺，差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。 　　1.2脊髓损伤模型的制备 　　动物腹腔麻醉后，背部剪毛，常规碘酒酒精消毒。沿脊柱正中切开皮肤，分离肌肉，暴露椎骨，用咬骨钳仔细咬去椎板，在T9与T11椎骨平面打开椎管，充分暴露T10节段脊髓背面及两侧，用弯头眼科镊将脊髓轻轻挑起，用眼科剪将脊髓完全剪断，将分离的肌肉缝合封闭椎管缺损，缝合皮肤，制成脊髓损伤模型。 　　1.3方法 　　正常组：仅行切皮、打开椎管，不施行SCI。 　　损伤组：脊髓全横断损伤。 　　联合移植组：在脊髓完全横断后1周移植大鼠NSCs悬液+姜黄素组（500nmol/L）。 　　1.4神经干细胞的提取、培养及鉴定 　　取孕14.5d左右的SD大鼠。常规消毒后用5mL注射器按0.06mL/10g剂量抽取适量5%水合氯醛腹腔麻醉，胚胎组织取出于无菌PBS中清洗，取胚胎额顶部2/3组织于盛有适量基础培养基的培养皿中，用刀片小心切碎后用200目滤网滤过，以去除大的组织块、血管、脑膜等组织。用5mL枪头小心用力均匀吹打15～20次，再经过400目细胞筛过滤来制成单细胞悬液。将制好的单细胞悬液分装到25mL无菌培养瓶，置于恒温培养箱孵育中进行培养。Nestin抗体及荧光二抗进行标识。 　　1.5BBB功能评分评价大鼠下肢功能行为学检测参照Basso等提出的大鼠SCI后功能评判标准（简称BBB评分法）对各实验动物后肢的运动功能进行评分。所有观察都在上午进行，评分前应将所有动物的膀胱排空，时间为4min，评分时采用双盲法。分别对损伤后1，2，4，8周的BBB评分进行比较。 　　1.6动物皮层体感诱发电位（CSEP）的测定 　　模型动物在术后1d及9周行CSEP检查。每只动物均测双下肢。 　　1.7斜板试验 　　将厚度为1cm表面带有沟槽的胶垫固定于一木板上，在术前及术后相应时间点将大鼠置于测试斜板上，斜板一端位置固定，另一端由水平位，即0度角逐渐升高，直至大鼠在斜板上所处位置无法停留达到5s时，用电子角度尺测量斜板与地面之间的夹角，获得该次斜板试验的角度值。每只大鼠共进行三次斜板试验，取平均值。 　　1.8统计学处理 　　采用SPS