聚酰胺―大孔树脂联用纯化菠菜叶总黄酮工艺研究.docVIP

聚酰胺―大孔树脂联用纯化菠菜叶总黄酮工艺研究 　　摘 要：采用聚酰胺-大孔树脂联用法对菠菜叶中总黄酮的纯化条件进行研究。以总黄酮的纯度和得率为考察指标，确定纯化菠菜叶总黄酮的最佳树脂为AB-8，其最佳纯化条件为：上样量与聚酰胺量之比为1∶2；上样量与树脂量之比为1∶8；乙醇洗脱的浓度为60%；洗脱流速为2 mL?min-1；洗脱剂的用量为2BV。总黄酮得率最高可达71.42%，纯度可达26.63%。 　　关键词：菠菜叶；总黄酮；纯化；聚酰胺-大孔树脂联用 　　中图分类号：S636.1 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2015.09.017 　　Study on Enriching Total Flavonoids from Spinach Leaves with Polyamide and Macroporous Resin 　　GUO Cai-zhen，CHU Pan-pan， QIAO Yuan-biao 　　（Department of Biology， Lyuliang University， Lyuliang， Shanxi 033000， China） 　　Abstract： Purigying total flavonoids from spinach leaveswith polyamide and macroporous resin was studying in this paper.Purity and yield of total flavonoids as investigates index.The best purified resin of total flavonoids in spinach leaves was AB-8，The optimum experimental conditions were：the best ratio of absorbing solution and polyamide was 1：2；the best ratio of absorbing solution and resin was 1：8；ethanol concentration was 60%；the eluting velocity was 2 mL?min-1；the dosage of the eluting solution was 2BV.The yield of total flavonoids reached to 71.42% and the purity was 26.23%. 　　Key words： spinach leaves；total flavonoids；purification；combination polyamide and macroporous resin 　　黄酮类化合物是植物次生代谢产生的一种天然产物，近年来研究报道了黄酮类化合物具有抗菌、降血糖血脂、抗肿瘤、抗氧化性、防治心脑血管疾病等丰富的药理活性[1-3]。蔬菜中黄酮类化合物的含量在0.21～6.44 mg?g-1，而且主要存在于叶中。叶菜中的黄酮类化合物含量远大于茎菜、果菜和根菜[4-7]。菠菜的叶片厚实而且叶肉多，所以含有较多的黄酮类化合物，具有较高的研究价值。目前对菠菜叶片的研究主要集中在色素及提取方面，很少涉及菠菜叶中黄酮类化合物的纯化。本试验首次用聚酰胺-大孔树脂联用对菠菜叶中总黄酮的纯化进行了初步研究，以期为其进一步的开发应用提供参考。 　　1 材料和方法 　　1.1 材 料 　　菠菜叶片：???新鲜的菠菜叶片洗净，置于60 ℃的恒温干燥箱中干燥，粉碎机粉碎备用。 　　1.2 试剂与仪器 　　试剂：石油醚、纤维素酶、无水乙醇、芦丁标准品、硝酸铝、亚硝酸钠、硝酸钠、氢氧化钠盐酸（HCl） 以上试剂均为分析纯；D4020、AB-8、S-8、X-5 大孔吸附树脂；聚酰胺。 　　仪器：电子天平：上海电子仪器；层析柱：上海玻璃仪器厂；高速万能粉碎机：天津市泰斯仪器有限公司；HH-8 数显恒温水浴锅：江苏金坛市荣华仪器制造有限公司；DGH-9053A 型电热恒温鼓风干燥箱：上海精宏实验设备有限公司。 　　1.3 方 法 　　1.3.1 总黄酮提取物的制备及含量测定 称菠菜叶片粉末适量，用石油醚脱脂后加10倍原料质量的蒸馏水混匀，按酶用量为6.5 mg?g-1，在46 ℃和pH值4.7的条件下进行纤维素酶预处理1.5 h，然后再加入20倍原料的70%乙醇溶液在70 ℃下恒温浸提2次，每次1 h，过滤，合并滤液，浓缩干燥，备用。总黄酮的含量采用NaNO2-Al（NO3）3比色法测定 [8]，以芦丁作标准品，在510 nm的