电针联合补肾活血方对pcos大鼠促排卵后子宫内膜容受性的影响及机制研究-中医妇科学专业论文.docx

I I 摘 要 目的 子宫内膜容受性是指子宫内膜能够接受胚胎着床的能力，容受性良好 则囊胚易于着床，妊娠率高。针对 PCOS 患者促排卵后子宫内膜容受性差， 目前主要采用的是补佳乐（雌激素），增加子宫内膜厚度的方法，但临床 效果不甚理想，中医药治疗疗效确切，能明显减少西药的不良反应。PCOS 子宫内膜发育异常且伴有 ER、PR、Integrinav?3、HOXA10 的表达异常， 本课题在前期研究的基础上，从促排卵后子宫内膜容受性着手，研究电针 联合补肾活血中药对 PCOS 促排卵后子宫内膜各不同时期（促排卵后、围 着床期、妊娠早期）容受性的影响，对临床防治多囊卵巢综合征、提高妊 娠率及降低流产率具有十分重要的理论意义和实用价值。 方法 清洁级 21 日龄雌性大鼠 450 只（计划 310 只，由于实验期间动物有 脱落补充），于 24 日龄，40 只皮下注射麻油作为正常对照组（G），模 型大鼠皮下注射 DHEA6mg／100g 体重／天+0.2ml 注射麻油,连续注射 20 天。将造模成功的 270 只大鼠采用随机数字表法分为模型组（M）、克罗 米芬组（CC）、克罗米芬+补佳乐组（CC+PVG）、克罗米芬+电针组（CC+A）、 克罗米芬+补肾活血方组（CC+M）、克罗米芬+针药结合组（CC+M+A），每 组 45 只。在 80 日龄，除正常组外，每组取大鼠 5 只，行阴道涂片观察动 情周期、测血清证实造模成功。余下每组均于 80 日龄起进行干预，克罗 米芬灌胃： 10mg/100g 灌胃，每只大鼠（ 1ml/100g ）灌胃；补佳乐 0.104mg/kg，每只大鼠（1ml/100g）灌胃；中药颗粒按 1:1 比例，将 12g 溶入 30ml 蒸馏水，每只大鼠（1ml/100g）灌胃，均连续灌胃 5 天。电针 治疗：选取关元、双侧三阴交、子宫穴,接 HANS-200 电针治疗仪，连续波， 频率 2Hz，强度为 1mA，通电 20min，1 次/d，连续治疗 5 天。 5 天治疗后，每组取 10 只做阴道涂片检查，发现角化细胞提示排卵， 次日处死大鼠取血清，摘取双侧卵巢子宫,解剖后观察情况并称重。左侧 II II 子宫用作 HE 染色,右侧子宫用做蛋白和基因检测。余下每组 30 只实验大 鼠均于下午 6:00 与雄鼠按 2：1 比例合笼,次日早 8:00 查阴道涂片,以发 现精虫者记为妊娠第一天（D1）,每组于妊娠 D4、D5、D8 下午 4:00 分别 处死 10 只,摘取双侧子宫，记录孕鼠数及胚泡着床数。光镜下观察子宫内 膜形态及微血管密度，电镜下观察饱饮突。采用 SP 免疫组化、RT-PCR、 Western-blotting 检测 ER、PR、整合素 av?3、HOXA10 的蛋白表达。 结果 1.促排卵后排卵率及妊娠情况比较 正常组排卵正常，CC+M+A 组接近正常组排卵率。且着床率为 88%，接 近正常组 100%。 2.促排卵后子宫内膜容受性影响 2.1 子宫内膜形态比较：CC+M+A 组与正常组无明显差异（P?0.05）， 与其它几组在腺体及腺腔等效直径、面积及子宫内膜厚度比较，有统计学 意义（P?0.05） ．RT-PCR 结果：各组 ER、PR、HOXA10、Integrinav?3 mRNA 比较， 正常组与 CC+M+A 组比较明显升高（P?0.05），CC+M、CC+A、CC+M+A 三组 之间无明显差异（P?0.05）。ER 及 Integrinav?3mRNA 比较，CC+M、CC+A、 CC+M+A、CC+PVG 四组之间无明显差异（P?0.05）；四组均较模型组、CC 组升高，有统计学意义。PR 及 HOXA10mRNA 比较：CC+M+A 与 CC+PVG 组、 模型组、CC 组比较升高，有统计学意义（P?0.05）。 Western-blotting 结果: ER、PR、HOXA10 比较基本同 RT-PCR 结果。 Integrinav?3 比较，CC+M+A 与 CC+PVG 组、模型组、CC 组比较升高，有 统计学意义（P?0.05） 2.4 电针联合补肾活血方对促排卵后子宫内膜容受性影响：子宫内膜 形态上，CC+M+A 组与正常组无差异，提示子宫内膜容受性好，通过蛋白 及基因测定，CC+M+A 组较正常组在 ER、PR、HOXA10、Integrinav?3 表达 稍低，但较其它几组表达显著升高。 3.大鼠妊娠 D4、D5 天(围着床期)子宫内膜容受性指标比较 PAGE PAGE VI 3.1.子宫饱饮突情况比较：正常组与 CC+M+A 组之间无明显差异 （P?0.05），子宫内膜饱饮突发育完全较高。 3.2.免疫组化比较：ER、PR、HOXA10、Integrinav?3