辛伐他汀对人U251胶质瘤细胞增殖影响.docVIP

辛伐他汀对人U251胶质瘤细胞增殖影响 　　【摘要】目的探讨辛伐他汀对人U251胶质瘤细胞增殖的影响。 方法本实验分对照组和实验组，实验组的干预浓度分别0．2、1．0、2．0、4．0、8．0 μmol/L 5组，干预后培养24、48、72、96 h，采用MTT比色法和流式细胞仪检测不同浓度及不同时间辛伐他汀干预后人胶质瘤细胞增殖活性和细胞周期的变化。 结果辛伐他汀可明显降低人胶质瘤U251细胞活性，浓度到达1．0 μmol/L时抑制作用明显。并和时间、浓度呈正相关，和对照组相比差异有统计学意义（P0．05）。结论辛伐他汀对胶质瘤的增殖具有一定的抑制作用。? 　　【关键词】辛伐他汀；胶质瘤细胞；增殖 　　 　　胶质瘤是颅内最常见的肿瘤，极大危害着人们的健康，目前对胶质瘤的治疗以手术治疗为主，辅助放疗和化疗。由于肿瘤细胞增殖活跃，向周围组织的浸润，肿瘤的自身的血管生成等，其预后仍很差，尤其是WHOⅢ－Ⅳ的恶性胶质瘤。他丁类药物是HMG－CoA还原酶抑制剂，一种新型的降血脂药物，研究发现他丁类药物具有体外抗肿瘤的作用［1］。本实验通过辛伐他汀体外干预胶质瘤细胞增殖实验，探讨辛伐他汀体外对人U251胶质瘤增殖的影响。? 　　1材料与方法? 　　 　　1．1材料人U251胶质瘤细胞株（中科院上海细胞库），辛伐他汀（杭州默沙东公司），甲基偶氮唑蓝（MTT）（Sigma公司），RPMI1640、0．25％胰蛋白酶（Gibico公司），DMSO（Ameresco公司），小牛血清（杭州四季青生物制品公司），超净台（苏州净化设备有限公司），CO?2孵育箱（美国Thermo Electron 公司），倒置显微镜（日本奥林巴斯公司），流式细胞仪（美国贝克曼库尔特公司），全自动酶标仪（美国宝特公司）。? 　　1．2实验分组实验分对照组和实验组，实验组的浓度分别为0．2、1．0、2．0、4．0、8．0 μmol/L 5组，? 　　1．3MTT检测胶质瘤U251细胞的增殖活性取对数生长期的胶质瘤细胞，用10%血清RPMI1 640培养基调细胞浓度为1×10?7/L，均匀加入96孔培养板，每孔200 μl，培养18 h，弃上清液，加入10％血清RPMI1640培养基，同时加入不同辛伐他汀（终浓度0．5～8．0 μmol/L），对照组加入PBS定容到200 μl，每组设4个复孔。分别培养24、48、72、96 h后换无血清RPMI1 640培养基180 μl，同时加入MTT?（5 mg/ml）20 μl，孵育4 h，倒出培养基，每孔加入DMSO150 μl，振荡10 min，在960型自动酶标仪上检测，490 nm波长测OD值，肿瘤细胞生长抑制率的计算：? 　　 　　1．5统计学处理所得计量数据采用均数±标准差（x±s），采用两样本均数间显著性比较，?（P0．05）差异有统计学意义。? 　　 　　2结果? 　　 　　2．1辛伐他汀对胶质瘤U251细胞增殖活性的影响? 　　辛伐他汀干预48 h后， MTT法测定显示，辛伐他汀对人U251胶质瘤细胞的生长抑制呈明显的量-效关系见表1。? 　　 　　2．2流式细胞仪检测细胞周期的结果? 　　 当辛伐他汀的浓度在1．0 μmol/L以上时，可明显抑制人U251胶质瘤细胞从G?1期进入S期。随辛伐他汀的浓度增加G?0/G?1期细胞明显增高。而S期细胞比、G?2/M期细胞比及PI值逐渐降低，与正常对照组相比差异有统计学意义（P0．05）见表2。?? 　　 　　3讨论? 　　 　　本实验采用不同剂量的辛伐他汀体外干预人U251胶质瘤细胞。用MTT检测该药物对肿瘤细胞抑制率情况，干预的辛伐他汀的浓度达到?1．0 μmol/L后对肿瘤细胞的抑制作用明显增加，与对照组相比差异有统计学意义（P0．05），而低浓度的辛伐他汀对胶质瘤细胞的抑制效果不明显。流式细胞仪检测肿瘤细胞周期显示，随干预辛伐他汀浓度增加，?G?0/G?1 期的细胞逐渐增多，处于S期和M期的细胞数减少，且呈浓度和时间依赖性。因此，本实验研究提示辛伐他汀对人U251胶质瘤细胞的增殖具有一定程度的抑制作用，并随浓度和时间的增加，呈现浓度和时间依赖关系。? 　　胆固醇是构成细胞膜的主要成分，维持细胞完整及细胞内外信息交换的基本物质。然HMGCoA还原酶是胆固醇合成的限速酶，其活性的高低直接影响细胞内胆固醇合成的量。细胞在增殖过程中从G?1期进入S期需要足量的甲羟戊酸，HMGCoA还原酶抑制剂能够使S期的细胞明显下降，出现G?1期的细胞堆积［2］。抑制HMGCoA还原酶的活性可以降低甲羟戊酸的含量，进而抑制了细胞的增殖，最终导致细胞的活性降低［3］。? 　　研究发现他丁类药物除了具有降低血脂之外，还有抗肿瘤的作用。Bank