辛伐他汀对脓毒症并发ARDS患者CD4 CD25调节性T细胞影响.docVIP

辛伐他汀对脓毒症并发ARDS患者CD4 CD25调节性T细胞影响 　　【摘要】 目的 研究辛伐他汀对脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征（ARDS）患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞（Treg）的影响。方法 65例脓毒症患者随机分为辛伐他汀治疗组（n=32）和对照组（n=33）。采集患者入选研究后的外周血行白细胞计数（WBC）， C反应蛋白（CRP）， 降钙素原（PCT）检测来反映患者的感染程度， 同时记录急性生理和慢性健康（APACHE Ⅱ）评分， 流式细胞术（FCM）检测各组入选时、1、3、5、7、14 d的外周血CD4+ CD25+ Treg的水平。结果 两组间的一般资料比较差异无统计学意义（P0.05）。辛伐他汀治疗组的CD4+ CD25+Treg在T淋巴细胞中的百分比逐渐下降， 第14天两组间比较差异具有统计学意义[（7.32±1.86）% VS （10.01±5.63）%， t=2.568， P=0.013）]。结论 辛伐他汀能改善脓毒症并发ARDS患者Treg过多的现象， 起到调节免疫紊乱的功能。 　　【关键词】 辛伐他汀；脓毒症；急性呼吸窘迫综合征；调节性T细胞；流式细胞术 　　脓毒症（sepsis）是感染引起的全身炎症反应综合征（SIRS）， 脓毒症的进一步发展可导致脓毒性休克和多器官功能障碍综合征（MODS）[1]， 有研究证明免疫紊乱状态时是脓毒症发展为MODS主要的机制之一[2]。CD4+ CD25+ 调节性T细胞（regulatory T cell， Treg）是目前研究最为深入的天然Treg， 脓毒症体内过多的Treg， 介导了脓毒症的免疫抑制功能[3]， 被认为和脓毒症诱导MODS有关[4]。脓毒症诱导的急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome， ARDS）是脓毒症在肺部的临床表现[5]。研究证明他汀类药物可有效控制脓毒症体内炎症水平， 降低病死率[6， 7]， 但具体机制尚未阐明， 因此本研究探讨辛伐他汀对脓毒症并发ARDS患者CD4+ CD25+ 调节性T细胞的影响， 为脓毒症的免疫调节治疗提供新的理论依据。现报告如下。 　　1 资料与方法 　　1. 1 一般资料 2013年8月～2014年8月本院重症医学科收治的65例脓毒症并发ARDS患者， 男41例（63.08%）， 女24例（36.92%）， 年龄19～87岁， 平均年龄（59.52±19.31）岁；原发病构成：下呼吸道感染19例（29.23%）， 腹腔感染16例（24.62%）， 外伤15例（23.08%）， 泌尿系统感染8例（12.31%）， 其他7例（10.77%）。脓毒症诊断参考脓毒症运动2012标准[8]， ARDS诊断标准参考柏林会议2012标准[9]。排除标准：①恶性肿瘤。②基础疾病有严重脏器功能不全。③3个月内服用过免疫抑制剂药物和（或）激素。数字随机法将65例患者分为辛伐他汀治疗组（n=32）和对照组（n=33）。 　　1. 2 研究方法 收集患者入院研究时的一般资料（包括年龄、性别、病因构成、病原菌构成、是否机械通气等）， 采集外周血行WBC， CRP， PCT监测来反映患者的感染程度， 同时记录APACHE Ⅱ评分反映患者的疾病严重程度。对照组按照脓毒症运动2012年指南给予治疗， 包括液体复苏， 抗生素治疗， 器官支持等；治疗组在对照组的基础上胃肠道给予辛伐他汀10 mg， 1次/d。收集各组患者入选时、1、3、5、7、14 d的外周血送检。 　　1. 3 Treg分离及检测 外周血标本1500 r/min离心4 min， 弃血清加入PBS混匀至3 ml， 加入6 ml 淋巴细胞分离液上层3000 r离心15 min后取中层白色细胞。再次离心后计数， 加入PE标记抗大鼠CD25单克隆抗体（5 μl/106）孵育15 min， 1800 r/min离心10 min后加入抗PE磁珠（20 μl/107）， 进行磁珠分选， 阳性选择获得CD25+ T细胞。解离试剂（20 μl/ml）解离10 min后再次磁珠分选， 阴选细胞后加入终止试剂（30 pl/ml）， 同时加入FITC标记抗大鼠CD4（10 μl/ml）孵育15 min。再加入CD4磁珠孵育15 min， 离心后磁珠分选， 阳选即得CD4+ CD25+ Treg。FCM检测双阳性细胞的含量。PE-CD25抗体、FITC-CD4抗体-CD4磁珠、大鼠抗PE试剂盒购自美国BD公司， FACS流式细胞仪：美国Becton-Dickinsion公司。 　　1. 4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料采用χ2检