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铁皮石斛丛生芽增殖和生长影响因素研究 　　摘要：以铁皮石斛丛生芽为材料，通过研究不同基本培养基、碳源及天然有机复合物等若干因子对铁皮石斛丛生芽增殖分化及壮苗生根的影响，筛选出适宜铁皮石斛组培苗快速繁殖的最佳配方，试图建立铁皮石斛组培苗的无菌繁殖系。研究结果表明，铁皮石斛丛生芽增殖分化的最适培养基为N6培养基，植株生长健壮；最适碳源为蔗糖；壮苗生根的最适配方为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+25%香蕉汁+3%白糖，生根率较高。 　　关键词：铁皮石斛；丛生芽；增殖；生长 　　中图分类号： S567.23+9.043文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）02-0036-03 　　收稿日期：2013-10-28 　　基金项目：广西教育厅项目（编号：2013YB207）；河池学院重点项目（编号：2012YBZ-N002）；广西高校重点实验室桂西北特色资源研究与开发实验室资助项目（编号：桂教科研[2010]6号）。 　　作者简介：苏江（1980―），女，广西宁明人，硕士，讲师，从事植物组织培养及相关生物技术研究。E-mail：suppersujiang@。石斛属是兰科植物中一个较大的属，全世界约110种，广泛分布于亚洲、欧洲和大洋洲等地。我国有74种2变种，分布于秦岭以南诸地区，尤其以云南南部为多。《中国药典》2005年版记载，能够入药的石斛有5种，其中以铁皮石斛（Dendrobium candidum）最为名贵。铁皮石斛为兰科石斛属多年生草本植物，俗称铁皮枫斗，又名黑节草，因其表皮呈铁绿色而得名[1]。铁皮石斛主要生长在高山峻岭悬崖峭壁和岩石缝隙中，是一种分布在岩溶地区的珍贵中药材植物，民间有“救命仙草”“中华仙草”的美称[2]。铁皮石斛是一种生长缓慢、自身繁殖能力很低的兰科附生植物，对生长环境要求十分严格。铁皮石斛从开花授粉至果实成熟约需6个月，一般借助昆虫或外力异花传粉，因而授粉不良，结果甚少。在自然条件下，种子萌发因缺乏营养物质，需与真菌共生，以获得养分的供给才能完成萌发，发芽率极低。铁皮石斛种子极小，不含胚乳，自然繁殖十分困难，加上人为的过度采挖和破坏生境，其资源已濒临灭绝[3-6]。目前，为满足国内外市场对石斛药源的需要，须通过人工培育的方法快速繁殖铁皮石斛。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　由河池学院植物组织培养实验室提供的铁皮石斛无菌芽。 　　1.2试验方法 　　1.2.1不同基本培养基对铁皮石斛丛生芽增殖和生长的影响设3个处理，即以MS、1/2MS、N6为基本培养基，添加激素6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.5 mg/L，白糖3%，琼脂7.0 g/L，pH值5.8～6.0，每个处理0.5 L。 　　1.2.2不同碳源对铁皮石斛增殖丛生芽和生长的影响设3个处理，即以白糖3%、蔗糖3%、葡萄糖3%为碳源，添加至MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基上，琼脂 7.0 g/L，pH值5.8～6.0，每个处理0.5 L。 　　1.2.3不同附加物及浓度对铁皮石斛丛生芽增殖和壮苗生根的影响设6个处理，即以香蕉汁、马铃薯汁各15%、20%、25%为附加物，添加至MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L 培养基上，琼脂7.0 g/L，pH值5.8～6.0，每个处理 0.5 L。 　　1.3测定指标及方法 　　1.3.1石斛芽的增殖率增殖系数=培养45 d后获得不定芽数/接种外植体数。 　　1.3.2株高随机抽取3瓶材料，在无菌超净台上用加热器高温灭菌的镊子将石斛苗从培养瓶中取出，每瓶约取出10株，置于培养皿中待用。用尺子测量30株石斛苗的株高，记录数据。 　　1.3.4根数及根长随机抽取3瓶材料，在无菌超净台上从培养瓶中取出约30株石斛苗，放至培养皿中待用。用镊子辅助数出肉眼可见的根数，并用尺子测量其根长，记录数据。 　　2结果与分析 　　2.1不同基本培养基对丛生芽增殖和生长的影响 　　试验结果表明，在添加激素6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.5 mg/L，白糖3%，pH值5.8等同等条件下，铁皮石斛丛生芽增殖率从高到低排列为N61/2MSMS，即以N6为基本培养基时最适合铁皮石斛丛生芽的增殖，增殖率最高，增殖系数达2.0，且芽叶片颜色浓绿，长势均匀整齐。1/2MS的增殖效果也很明显，增殖系数为1.9，但是石斛芽较矮小，颜色略带黄色。MS的效果最差，增殖率最低，但是MS培养基的石斛芽最健壮，茎的生长最明显（表1、图1、图2、图3）。 　　2.2不同碳源对铁皮石斛丛生芽增殖和生长的影响 　　试验结果表明：不同的碳源对铁皮石斛的增殖和丛生芽 　　生长有不同的效果（表2），其中蔗糖的