铁对紫球藻生长及可溶性蛋白和胞外多糖含量影响.docVIP

铁对紫球藻生长及可溶性蛋白和胞外多糖含量影响 　　摘要：通过研究不同铁离子浓度条件下紫球藻的比生长率、主要叶绿素含量、可溶性蛋白及胞外多糖含量的变化情况，来阐述铁离子对紫球藻生长的影响。结果表明，添加不同浓度的Fe3+对紫球藻的生长有明显的促进作用；Fe3+浓度在5×10-7～5×10-5 mol/L范围内时，紫球藻的生长和叶绿素a、β-胡萝卜素、可溶性蛋白、胞外多糖的积累随Fe3+浓度的升高而增加，当Fe3+浓度为5×10-4 mol/L时，紫球藻的生长较为缓慢，其细胞密度略低于其他处理及对照组，且上述各指标均与5×10-5 mol/L处理组之间无显著差异。因此，紫球藻培养中铁的最适添加浓度约为5×10-5 mol/L。 　　关键词：紫球藻；铁；可溶性蛋白；胞外多糖 　　中图分类号： S968.43+9 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2017）01-0159-04 　　铁是浮游植物的微量营养元素和催化元素，是浮游植物生长的关键限制因子之一，影响着浮游植物的电子传递、氧的新陈代谢、氮的吸收利用、呼吸作用和光合作用[1]，且在海洋“生物泵”循环过程起着关键作用[2]。20世纪30年代初，研究学者提出铁是海洋浮游植物生长的潜在性限制因子[3-6]。李丽研究了铁离子对三角褐指藻（Phaeodactylum tricornutum）、小球藻CS-01（Chlorella sorokiniana CS-01）和等鞭金藻（Isocrydid galbana）生长和脂质积累的影响，发现铁对这3株微藻的生长和脂质积累均有促进作用，同时还比较研究了铁、镁、铜、钙对小球藻生长和脂质积累的影响，其中铁离子的影响最为显著[7]。王培磊等研究了铁对盐生杜氏藻（Dunaliella salina）生长和β-胡萝卜素积累的影响，结果表明，较高浓度的铁有利于其β-胡萝卜素的积累[1]。 　　紫球藻（Porphyridium cruentum）细胞呈圆形或卵圆形，外披黏质的鞘膜，隶属于红藻门（Rhodophyta）原红藻纲（Protofloridcophyceac）紫球藻目（Porphyridiales）紫球藻科（Porphyridiaceae）紫球藻属（Porphyridium），是红藻门中唯一的单细胞藻类，紫球藻广泛分布于海水、淡水、咸水及潮湿的土壤中[8]。关于紫球藻的研究主要集中在培养工艺的优化改良和多种生物活性物质的开发利用方面[9]。已有相关文献研究表明[10]，基于藻类的光合作用效率和生长潜能，1 hm2大小的土地理论上计算可以生产超过30 000 L，即200桶油的量，相当于同样土地上大豆产油量的100倍，而紫球藻生长快、繁殖周期短，且抗盐性强，具广阔的应用前景及较大的潜在市场。本研究主要探讨了不同浓度的铁离子对紫球藻比生长率和叶绿素a、β-胡萝卜素、可溶性蛋白、胞外多糖含量的影响，以期为进一步探讨紫球藻的培养条件以及生物活性物质的提取提供有益参考。 　　目前，国内外关于海藻多糖的研究主要集中在其组成、结构分析、生理活性及药理试验等方面，而对于影响或促进海藻多糖合成和分泌的外界物理因子的研究相对比较少。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验藻种 　　紫球藻藻种，由中国科学院水生生物研究所藻种库提供。 　　1.2 培养条件 　　试验采用f/2培养基，以自然光照为光源，光―暗周期为12 h―12 h，光照度为2 000～2 500 μmol/（m2?s），培养温度为（27±2） ℃。设置对照组和4个处理组，处理组培养基中铁离子浓度分别为5×10-7、5×10-6、5×10-5、5×10-4 mol/L，每组分别设置3个平行，按10%的量接种紫球藻液，试验进行培养周期为14 d，每2 d取样1次测定相关指标。 　　1.3 各项指标的测定及方法 　　1.3.1 紫球藻比生长率的测定 用血球计数板记录紫球藻细胞数，每个重复均需要测定后取平均数。 　　相对生长率=ln（X2-X1）/（T2-T1）。 　　式中：X1和X2分别代表T1和T2时紫球藻细胞的浓度。 　　1.3.2 叶绿素a的提取与测定 参考韩娟等的方法[11]，取紫球藻液，4 500 r/min离心5 min，弃上清液，藻团中加入甲醇振荡混匀，70 ℃水浴振荡5 min，自然冷却后4 500 r/min离心5 min取上清液，即?樽锨蛟逡堵趟?a提取液，1 cm光径下测定750、665 nm波长处的吸光度。 　　叶绿素a含量=13.9×（D665 nm-D750 nm）×V1/V2。 　　式中：V1为最终体积，V2为取样体积，13.9为相关系数。 　　1.3.3 β-胡萝卜素的提取与测定 参考刘建国等的方法[12-13]，取紫球藻液，4