铁皮石斛转录因子基因DoWRKY1克隆与表达分析.docVIP

铁皮石斛转录因子基因DoWRKY1克隆与表达分析 　　[摘要]WRKY转录因子是植物中发现的新型转录调控因子，在调控植物生长发育和代谢等生理过程中发挥重要作用。该研究采用RT-PCR和RACE技术从铁皮石斛Dendrobium officinale中克隆得到一个新的WRKY转录因子基因cDNA全长，命名为DoWRKY1，提交GenBank获得登录号KF716131。生物信息学分析表明，该基因全长cDNA为1 704 bp，其中开放阅读框 （ORF） 1 629 bp，编码1条由542个氨基酸组成的多肽，具有2个WRKY保守结构域，属于WRKY家族第Ⅰ类转录因子。酵母单杂交表明，DoWRKY1可以激活下游报告基因 （His3，Ade2） 的表达，具有转录激活功能，属于转录激活子。半定量RT-PCR显示，DoWRKY1在根、茎、叶和类原球茎中均有表达。qRT-PCR分析表明，DoWRKY1响应茉莉酸甲酯 （MeJA） 和壳聚糖 （chitosan） 诱导，分别在2 h和1 h，表达量达到最高峰。研究结果为进一步研究其在铁皮石斛次生代谢过程的调控功能奠定基础。 　　[关键词]铁皮石斛;WRKY转录因子;基因克隆;转录激活;表达分析 　　Cloning and expression analysis of transcription factor gene 　　DoWRKY1 in Dendrobium officinale 　　ZHAO Jun， SUN Shi-wei， MENG Can-can， JIN Qing， FAN Hong-hong， LIN Yi， CAI Yong-ping* 　　（School of Life Sciences， Anhui Agricultural University， Hefei 230036， China） 　　[Abstract]WRKY transcription factors are novel transcriptional regulatory factors， which play an important role in regulating plant development， metabolism and other physiological processes. In this study， a new Dendrobium officinale WRKY transcription factor， designated as DoWRKY1 was cloned by using RT-PCR and RACE （GenBank Accession No. KF953910）. Bioinformatic analysis demonstrated that， the full-length cDNA of DoWRKY1 was 1 704 bp. And DoWRKY1 contained a 1 629 bp open reading frame （ORF） that encoding a peptide of 542 amino acid residues. The putative DoWRKY1 protein contained two conserved WRKY domains and it belonged to the groupⅠWRKY family protein. Yeast one-hybrid experiment showed that DoWRKY1 had transcriptional activation ability in yeast， and it could activate the expression of downstream report genes （His3 and Ade2）. Semi-quantitative RT-PCR experiment showed that DoWRKY1 expressed in roots， stems， leaves and protocorm-like bodies. Real-time qRT-PCR proved that DoWRKY1 could be induced by methyl jasmonate （MeJA） and chitosan （Chitosan）， and the expression level of this gene can reach the expression peak at 2 h and 1 h， respectively. These results are useful for further