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针刺对溶栓治疗急性脑梗塞患者D二聚体影响 孟庆刚　孔庆爱　唐　强　高兵兵　张宁指导:于致顺 　　(大连大学医学院,辽宁116622;大连市中医医院;黑龙江中医药大学附属二院) 　　摘　要　选择107例急性脑梗塞患者,根据发病时间顺序按随机表将其分为8组。采用D-二聚体为指标,进行治疗前后连续性检测。结果:早期针刺组中D-二聚体的改善程度均优于其它各组(P0.05),表明头穴透刺有助于溶栓,尤其是早期溶栓(12 h以内)。针刺在尿激酶对血栓的溶解过程中起到很重要的作用,从某种意义上讲,针刺拓宽了治疗时窗,从而为挽救缺血性半暗带创造了有利条件。 　　主题词　脑梗塞/针灸疗法　血栓溶栓疗法　D-二聚体?? 　　 　　针刺治疗急性脑梗塞疗效确凿。近年来,临床发现针刺对溶栓治疗急性脑梗塞有积极的促进作用。以往的研究资料表明:D-二聚体检测是一项鉴别原发性纤溶和继发性纤溶以及监测溶栓治疗的有价值的指标。因此,笔者利用自制单克隆抗体,建立酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法检测血浆D-二聚体含量,观测针刺对溶栓患者D-二聚体的影响,以进一步证实针刺在促进纤溶过程中的作用。 　　1　一般资料 　　 　　1.1　研究对象 　　观察组A自1996年5月～1997年10月选取了107例发病在24 h以内的经CT证实确诊为急性脑梗塞(颈内动脉系)住院患者,男67例,女40例;年龄35～75岁,平均53.6岁。按入院先后顺序分为发病12 h以内组B1(含12 h)、和大于12 h组B2(含24 h)。然后再将12 h以内组病人随机分为早期针刺溶栓组(A1B1)13例,早期溶栓组(A2B1)11例,早期常规治疗组(A3B1)13例,早期针刺常规治疗组(A4B1)12例;同理,将大于12 h B2组病人随机分为针刺溶栓组(A1B2)16例,溶栓组(A2B2)14例,常规治疗组(A3B2)13例,针刺常规治疗组(A4B2)15例。拟以溶栓组(A2)、常规治疗组(A3)、针刺常规治疗组(A4)为针刺溶栓组(A1)的对照组。以上各组病人,均由神经内科医师根据临床评分、CT、病理和实验室检查结果诊断,符合有关诊断标准。 　　对照组C正常组C1(40例),健康中青年男女各半;年龄20～50岁,平均43岁。均为医院健康献血员。老年人组C2(20例),健康老年人男12例,女8例;年龄51～75岁,平均57.7岁。均经体检排除高血压、冠心病、高血脂、糖尿病,无烟、酒嗜好,近2周内无服药史。 　　1.2　观测指标D-二聚体单抗的制备 　　纯化抗原:在200 mg纯纤维蛋白原(Fg)中,分别加入5 mmol/L的CaCl?2,50 U的纯凝血酶,4 mg的因子XⅡ,0.15 mol/L的NaCl,0.1 mol/L Tris,使pH=7.4于37 ℃温育18 h后,再分别加入1.2 mg纯纤溶酶,500 U的尿激酶,静置18 h后,用0.01 mol/L的Tris缓冲液透析,pH=8.6。然后用DEAE-52层析,SDS电泳分析,将D-二聚体部分合并。用PEG透析浓缩后再次分离,得到纯度较高的D-二聚体作为抗原。 　　单抗制备:选用8周龄雄性BALB/C小鼠,用福氏完全佐剂加20 μg D-二聚体纯抗原,常规腹腔注射,免疫2次,间隔4、8周,再用20 μg D-二聚体抗原加强免疫,4天后杀死小鼠,取脾做细胞融合,2周后待细胞克隆长到约为培养孔的1/8时,用抗原进行筛选,得到8个特异性D-二聚体单抗株。 　　1.3　研究方法 　　(1)ELISA法的建立 　　采用双抗体夹心法。用1株自制D-二聚体单抗,包被于聚丙乙烯塑料板,另1株单抗标记辣根过氧化物酶,经交叉配对试验,找到2株能够用于D-二聚体的捕捉法测定,此即ELISA双抗体夹心法。 　　(2)D-二聚体检测方法 　　血浆准备:取患者静脉血,用0.13 mol/L檬酸钠1∶9抗凝,3000 r/min,低温离心,分离血浆,于-20 ℃下保存待检。 　　检测方法:在包被单抗的酶标反应板上,加入待检样品和不同稀释度的标准品,37 ℃温育1 h后,洗4次,再加入酶标记的单抗,37 ℃温育30 min后,洗4次,再加OPD底物显色,37 ℃温育15 min,加2 mol/L硫酸中止反应。最后在492 nm波长下比色,根据曲线求得D-二聚体含量,单位是mg/L血浆。 　　(3)治疗方法 　　针刺溶栓组A1:包含B1、B2两组,入院后即针刺同时检测指标,然后再静脉溶栓。 　　溶栓方法:采用南京大学制药厂生产的尿激酶50～75万U,加入0.85% NaCl 250 ml,每日1次静滴,1～1.5 h滴完,连用3天。用药前常规检查出凝血时间、血小板,没有出血倾向时可用。同时口服维生素C