锦鸡儿根瘤菌生理生化特性及其对宿主生长影响.docVIP

锦鸡儿根瘤菌生理生化特性及其对宿主生长影响 　　摘 要：文章对两株锦鸡儿根瘤菌的生长特点和生理生化特性进行比较研究，通过回接实验分析两株根瘤菌对锦鸡儿植物生长的影响。结果表明：（1）在YMA培养基上I号菌株生长比II号菌株快；（2）两菌株细胞表面成分中纤维素含量都较少；（3）两菌株的耐盐能力相同，pH值生长范围一致、但生长的最佳pH值不同；（4）两菌株对所测碳源利用的有差异，对所测氮源的利用情况较一致；（5）两菌株都可以促进锦鸡儿植株的生长，其中II号菌株对锦鸡儿生长的促进作用大于I号菌株。 　　关键词：锦鸡儿；根瘤菌；生理生化；回接实验 　　锦鸡儿属（Caragana）植物属于豆科植物、落叶灌木，是欧-亚草原植物亚区的典型植被。全世界约有100余种，我国的锦鸡儿属植物主要分布在荒漠区和草原[1，2]。锦鸡儿属植物具有耐寒耐瘠薄、防风固沙、保持水土的能力，可提高土壤肥力、改善土壤结构，在荒漠化生态环境中发挥着重要角色。李香真等报道在退化草地恢复过程中，小叶锦鸡儿灌丛诱导了植物组成、生物量和土壤化学元素含量在空间上的分异，这种生态效应有利于退化草地的恢复[2-4]。此外，锦鸡儿属植物具有绿肥、燃料、饲料、油脂等资源价值，在食品、医药、能源、畜牧业等领域有广泛的应用前景[5，6]。 　　根瘤菌与豆科植物的共生固氮体系是已知固氮能力最强的生物固氮体系之一，所固定的氮量占全球生物固氮总量的65%以上[7]。有许多关于根瘤菌的分类、固氮机理、与宿主相互作用等的报道，但研究主要集中在对大豆、苜蓿、紫云英等草本豆科植物。对锦鸡儿、沙冬青、刺槐等乔木、灌木、半灌木豆科植物根瘤菌资源的研究有些不足[8-10]。锦鸡儿属植物是内蒙及西部荒漠化地区生态恢复与重建的先锋树种，锦鸡儿植物生态功能的发挥与其根瘤固氮作用密切相关。锦鸡儿根瘤固氮作用可以促进植株生长和植被恢复，有助于提高群落结构复杂性、生物多样性，保持和恢复生态平衡[3，11]。文章对从锦鸡儿根瘤分离的菌株进行耐盐、耐酸碱、碳氮源利用等生理生化特性测试，并回接锦鸡儿研究其对宿主生长行为的影响，为实施退耕还林还草进行可持??性农业发展提供理论依据和技术支持。 　　1 材料与方法 　　1.1 菌株 　　供试根瘤菌I号菌株和II号菌株由内蒙古农业大学农学院病理教研室分离、鉴定和保藏。 　　1.2 生长曲线的测定 　　将I、II号菌株接种到YMA培养基（甘露醇10g、酵母提取粉0.8g，K2HPO4 0.2g、KH2PO4 0.2g、MgSO4?7H2O 0.2g、NaCl 0.1g、琼脂15g、蒸馏水1000ml），28℃条件下培养。每天测定细菌的生物量，连续测定7天。 　　1.3 生理生化特性的测定 　　1.3.1 刚果红染色反应 　　将80？滋gml-1刚果红加入到YMA固体培养基中，灭菌后倒平板。接种供试菌株，28℃条件下培养5天，观察菌落颜色。 　　1.3.2 耐盐性测试 　　将NaCl加入到YMA培养基中配成浓度为1%、2%、3%、4%、5%和6%等梯度，以不加NaCl的YMA平板培养基为对照，灭菌后倒平板。接种供试菌株，28℃条件下培养7天后称量生物量，每个处理3个重复。 　　1.3.3 耐酸碱性测试 　　用HCl和NaOH将YMA培养基调节pH值为3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0等梯度。培养测量同上。 　　1.3.4 单一碳源的利用 　　选用YMA培养基进行测试，利用的碳源分别是：甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉，每种碳源加10g/1000ml。培养测量同上。 　　1.3.5 单一氮源的利用 　　选用YMA培养基进行测试，利用的氮源分别是：酵母提取粉、酵母膏、蛋白胨、牛肉膏、NH4NO3、（NH4）2SO4、NH4Cl、KNO3、NaNO3，每种氮源加0.8g/1000ml，不加氮源为对照。培养测量同上。 　　1.4 回接实验 　　锦鸡儿种子用75%的酒精处理15min，用30%的H2O2进行表面消毒5min后，无菌水冲洗。经过消毒的种子置于培养皿中催芽2天，将发芽的种子栽于花盆中（土壤与蛭石1：1混合）。出苗生长4周后接种I号、II号菌株，每盆接种10ml供试菌株YMA液体培养物，对照接种10mlYMA液体培养基，每个处理22个的重复，生长9周后收获。 　　1.5 数据处理 　　利用EXCEL软件进行数据归纳总结，并根据计算的出的平均生物量构建图表；并用SPSS统计分析软件进行单因子方差分析。 　　2 结果与分析 　　2.1 根瘤菌的菌落形态和生长特征 　　供试根瘤菌I号和II号菌株的菌落形态见图1。图1I是I号菌株28℃条件下培养3天的菌落形态，图1II是II