重组酵母菌乙醇脱氢酶基因的克隆及序列分析.docx

重组酵母菌乙醇脱氢酶基因的克隆及序列分析 吕杰，金湘．毛培宏 (新疆大学物理科学与技术学院离子束生物技术中心，新疆乌鲁木齐830008) 摘要：目的：克隆产麻黄碱重组酵母菌乙醇脱氧酶基因片段，并对其进行序列分析，为研究该基因在重组酵母中与麻黄碱生 物合成途径的天系提供参考。方法：根据一段利用抑制差减杂交技术获得的来源于重组酵母乙醇脱氢酶基因片段，采用RAcE 的方法扩增A幽基因，使用分子生物学软件对该基因进行生物信息学分析。结果：获得一段大小为l 245 bp的基因片段，编码 375个氨基酸，含有两个催化域和两个锌结合域，与来源于c口，渤kh 60池n“ADH3基因的f司源性为85％。结论：克隆的基因为乙 醇脱氢酶基因．并在cenBank注册，登录号为JF293468。 关键词：重组酵母菌；乙醇脱氢酶基因；克隆；序列分析 中围分类号：Q785 文献标识码：A doi：lO．3969／j．i∞n．1004—3llX．2011．04．087 Cloning and Sequence Analysis of AlcohoI Dehydrogenase Gene from the Recombined Yeast ． LV Jie。JlN Xiang，MAO Pei—hong’ (11le Center of lon B蝴Bio眦hnology．college“Physics Science柚d 1khnolo鼍；y，Ⅺnji锄g Univendty，UⅢmqi 830008，china) Abst髓cI：obj删弛：Clone the recombined ye踮t alcohol dehydrogenase gene，and analyze the sequence with bioinfonmtic8 for t}Ie purpose of studying tIle relati∞between“cohol dehydm{驴na∞gene粕d dle bios”thesis pathway 0f eph幽ne．Method：Gene 8pecial—me瑁were desi卵ed based on the fra目ment of柚cohol dehydmgen鹊e hm the recoIIlbined ye硒tby suppression subtraction hyb—djza60n，tIle alcohol dehydrogenase gene w鸽obtained by RAcE，锄d molecular bioIogical dhares were used to锄aly珑homolo舀es．R嚣Illt：nle alcohol dehy‘ drogena鸵gene contai啮l 245 bp nucIeotide acids，encodirIg a pmtein of 375踟ino acids，with mo catalytic domain and two inserted zinc binding d啪ailL HomoIogy comp枷son result showed tllat tlle alcohol dehydmgen鹅e gene noted a high identy with Candida boidinii AD}13 gene．Cond璐i蚰：11le cloned fhgment w船alcohol dehydrogena鸵gene，and re画stered into GenBanl‘(accession number：JF293468)． 1【ey帅rds：”ecombined ye鹊t；alcohol dehydrogen鹅e gene；cloning；卵qllence arIalysis 产麻黄碱重组酵母菌是通过氮离子(N+)和氩离子 (Ar+)注入介导蓝麻黄基因组DNA在异常汉逊酵母(舶厅· 鲫n如口肋砷4I[口)和酿酒酵母中(S口∞kro哟傥s唧聊厶妇)随机 转化后。通过目标性状的选择性筛选获得的12株以葡萄糖为 碳源，NaN0，为氮源的转基因重组酵母菌¨’21。 采用抑制差减杂交技术(suppression subtracti加hybridiza． ti曲，sSH)分析重组酵母菌在分泌表达麻黄碱时相对于原始菌 株高表达基因时，分离得到一段424 bp的乙醇脱氢酶基因(al一 收藕日期：20】J—03—23；修回日期：201l—05—30 基金项目：新疆维吾尔自治区自然科学青年基金项目(20092llB06)资 助 作者简介：吕杰(1978一)，男．鸟鲁木齐人．博}，讲师．从事微牛物基 因]：程制药、分子乍物学和离子束生物技术研究。·通讯作者：毛培 宏(1960一)，男