- 1、本文档共22页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
发育生物学实验 主讲教师:薛秀花 北京师范大学生命科学学院2016年 一、拟南芥简介 二、实验技术---农杆菌介导拟南芥转化 实验1 拟南芥室内培养观察及 农杆菌转化拟南芥 农杆菌介导拟南芥的转化 实验目的 1、学习真核生物的转基因技术及农杆菌介导的转化原理 2、掌握农杆菌介导转化拟南芥 的实验方法 3、了解拟南芥的生理特点及在基因工程实验中应用。 实验材料 农杆菌GV3101重组菌株,重组双元表达载体pCAMBIA1300 ,拟南芥 实验试剂 LB液体培养基,Kan(卡那霉素),Rif(利福平); 转化介质 :MS培养基、5%蔗糖,0.03%SilwetL-77,KOH调pH 5.7。 实验原理 双子叶植物 无宿主限制,技术限制 原生质体培养 农杆菌介导拟南芥的转化 浸花法 叶盘法 原生质体共培养 创伤植物感染法 实验原理 农杆菌介导拟南芥的转化 农杆菌的感染与生存 技术应用 一种方便,高效的植物转基因方法,多用于转化双子叶植物,经过改进后也逐渐用于单子叶植物的转化。 实验原理 农杆菌介导拟南芥的转化 McKinney et al 2001 拟南芥转基因技术: In planta Agrobacterium-mediated gene transfer by infiltration of adult Arabidopsis thaliana plants. C R Acad Sci Ser III Sci Vie Life Sci 1、影响因素 MS salts, hormone, OD of bacteria, vacuum, etc. 无影响 Plant health 非常重要因素 2、转化效率: 1% 3、转化步骤 a、Grow healthy Arabidopsis plants until they are flowering. 8、高压灭菌 (1) MS培养基(121oC,15分钟)。 (2)玻璃烧杯:200ml 2个、500ml 1个、 50ml的三角瓶 20个、培养皿8个( 4培养皿装滤纸,6片/平皿)。 (3)枪型镊子、剪刀各2把。 (4)1ml、200ul、20ul的tip头各1盒。 (5)无菌水500~700mL*2 拟南芥转基因技术: McKinney et al 2001 1、影响因素 MS salts, hormone, OD of bacteria etc. 2、 3、 4、 作 业 预习:烟草叶片愈伤组织诱导和器官发生 课后各组查阅资料,设计3个不同浓度的NAA和6-BA,用于诱导不同器官,如芽、根、叶等
您可能关注的文档
- Discovery_Studio_215中基于药效团药物设计方法和应用.ppt
- EASL临床实践指南肝硬化腹水自发性细菌性腹膜炎肝肾综合征处理中文版.pdf
- FDA体内药物代谢药物相互作用研究-试验设计、数据分析、关于剂量和药品说明书建议介绍.docx
- GCP-20174月-北京01医疗器械GCP重点内容和相关工作介绍.pdf
- 2012版EASL慢性乙型肝炎管理指南.ppt
- GOLD 2016年更新.pdf
- 2011年版中国脑卒中康复指南.pptx
- GOLD解读(2015年).ppt
- Graves眼病护理查房.ppt
- Graves眼病诊断和治疗进展.ppt
- 四川省德阳市罗江中学2025届高三考前热身化学试卷含解析.doc
- 山东省枣庄现代实验学校2025届高三下学期第五次调研考试化学试题含解析.doc
- 吉林省长春市十一高中等九校教育联盟2025届高三一诊考试生物试卷含解析.doc
- 2025届江苏省盐城市伍佑中学高考仿真模拟化学试卷含解析.doc
- 2025届广西贺州中学高考冲刺押题(最后一卷)生物试卷含解析.doc
- 安徽省池州市贵池区2025届高三第一次模拟考试生物试卷含解析.doc
- 宁夏银川一中2025届高三(最后冲刺)化学试卷含解析.doc
- 广东省广州市增城区四校联考2025届高考压轴卷化学试卷含解析.doc
- 2025届邯郸市第一中学高考生物必刷试卷含解析.doc
- 2025届安徽省安庆市石化第一中学高考仿真卷化学试卷含解析.doc
文档评论(0)