实验十二 平板菌落计数法和光电比浊计数法课件.pptVIP

实验十二;学习平板菌落计数的基本原理和方法； 了解光电比浊计数法的原理，掌握光电比浊计数法的操作方法。 ;二、基本原理——平板菌落计数法;二、基本原理——光电比浊计数法;菌种：枯草芽孢杆菌。 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。 仪器或其他用具：无菌吸头，移液器，无菌平皿，无菌水，盛有4.5mL无菌水的试管，试管架，恒温培养箱，721型分光光度计，恒温水浴锅，记号笔等。;枯草芽孢杆菌作用的三个领域： 一、肥料发酵做生物有机肥或微生物肥料时作为原料添加在一起发酵使用；功效：1、提高作物抗病、抗旱、抗寒能力；2、增加土壤养分、改良土壤结构、提高化肥利用率；3、促使土壤中的有机质分解成腐殖质，刺激作物生长；4、促进作物生长，成熟，降低成本、增加产量，提高收入；5、有一定的固氮、解磷、解钾作用。; 二、饲料发酵做生物饲料或养殖用的营养性饲料时作为饲料原料添加剂一起发酵使用；功效：; 三、水产养殖水质净化、水产养殖水环境净化和水产养殖池底净化处理处恶臭等。 功效：;四、操作步骤;2、平板菌落计数： （1）编号：取无菌平皿9套，分别标明为10-4、10-5、10-6各三套，另取6支无菌试管，装入4.5mL无菌水，依次标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6； （2）稀释：任选一支上述盛有已测OD值的菌悬液的试管，如1号试管，精确地取0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。将10-1的试管振荡混匀。另换一支吸头插入10-1试管中来回吹吸菌液三次，进一步将菌体分散、混匀。再用此吸管精确吸取10-1菌液0.5mL至10-2试管中，此即为100倍稀释，依次类推； （3）取样：用移液器分别吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌悬液各0.2mL ，对号放入编好号的无菌平皿中； （4）倒平板：尽快向上述盛有不同稀释菌液的平皿中倒入融化后冷却至45℃的牛肉膏蛋白胨培养基约20mL，置水平位置迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀； （5）培养：待培养基凝固后，平板倒置于37℃培养箱中培养48h； ;;;（6）计数：算出同一稀释度三个平板上的菌落平均数，并按下列公式进行计算： 每毫升中菌落形成单位（cfu）= 同一稀释度三次重复的平均菌落数 ×稀释倍数×5 一般选择每个平板上长有30-300个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适。 在得到1号试管中菌悬液菌量的基础上，根据稀释度推算出另外5支试管中已知OD值的菌悬液的菌量。 3、标准曲线制作 以光密度(OD)值为纵坐标，以每毫升细胞数为横坐标，绘制标准曲线。 4、样品测定 待测样品用无菌水适当稀释，摇匀，480nm波长测定光密度。测定时用无菌水作空白对照。 5、根据所测的光密度值，从标准曲线查得每毫升的含菌数。;