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酵母RNA的提取及组分鉴定 目的要求 （１）了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。 （２）了解核酸的组分并掌握其鉴定方法。 实验原理 酵母核酸中RNA含量较多，含 RNA 2.67％～10.0％，DNA很少（0.03％～0.516％），且菌体容易收集，RNA也易于分离，所以选用酵母为实验材料。 RNA提取制备方法：苯酚法、去污剂法和盐酸胍法，提取的RNA具有生物活性；工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。 RNA的溶解性质：溶解在水溶液中，而不溶于乙醇和氯仿等有机溶剂中。可以利用乙醇把核酸从水溶液中沉淀下来。 。 稀碱法：利用稀碱溶解细胞壁，皂化细胞膜脂质、使酵母细胞裂解，RNA释放出来， 然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。 这种方法提取时间短，但RNA的磷酸酯键对碱敏感，在此条件下不稳定，容易水解。 RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮可使RNA水解，从水解液中可用定糖，定磷和加银沉淀等方法测出上述组份的存在。 RNA对酸的敏感性： 糖苷键＞磷酸二酯键； 嘌呤糖苷键＞嘧啶糖苷。 二、材料 干酵母粉。 三、器材 移液管0.2 mL（×1），0.5 mL（×2），1mL（×4），2 mL（×4）；滴管；容量瓶50 mL（×3）；量筒10 mL（×1）；离心机；分光光度计；冰浴；水浴锅。 操作方法 一、RNA制备 1、提取 称5g干酵母粉悬浮于30 mL 0. 2% NaOH溶液中并在研钵中研磨均匀。悬浮液转入三角烧瓶，沸水浴加热30 min （ 60g干酵母粉研磨后悬浮于250 mL 0. 2% NaOH溶液） （加热至90～100℃使酵母蛋白质变性，破坏两类磷酸酯酶(磷酸二酯酶和磷酸单酯酶)，有利于RNA的提取。 ） 2．分离 冷却，转入离心管。 30 mL 0. 2% NaOH溶液心15分钟后 ,或者抽滤，将使提取液与菌体残渣等分离。 3．沉淀RNA 将上清或滤液慢慢倾入10 mL酸性乙醇，边加边搅动。 4．洗涤和抽滤 加毕，静置，待RNA沉淀完全后，3000 r/min离心3 min。弃去上清液；或抽滤收集RNA沉淀。然后转于布氏漏斗上，再用 95％乙醇5～10ml淋洗 3次。 5．干燥 从布氏漏斗上取下沉淀物，放在6cm表面皿上，铺成薄层，置于80℃烘箱内干燥，或在电热套上微火烘干。
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