第2讲 植物组织培养课件.pptx

第二讲植物组织培养李金亭Tel:mail: Lj126.com河南师范大学生命科学学院本讲主要内容：一、植物组织培养的理论基础二、植物组织培养操作技术知识点:基本概念：有性生殖、无性生殖、植物细胞全能性、细胞分化、脱分化、再分化、愈伤组织等；植物离体培养中再生植株有哪些途径？愈伤组织是如何形成与生长的？一、植物组织培养的理论基础1、植物的无性繁殖：不经过精、卵细胞的结合，而是通过母体的部分组织或器官来进行繁殖的方式。2、植物细胞的全能性（Totipotency）植物的全能性：1879年Hansen提出，即植物体的部分组织或器官具有发育成完整植株的潜在能力，称之为植物的全能性。植物细胞的全能性：1902年由Haberlandt提出，每一个植物细胞具有该植物的全部遗传信息，都有分化成一个完整植株的潜在能力。细胞全能性的相对性:细胞全能性并不意味着任何细胞均可以直接产生完整植株;动植细胞全能性的表现程度存在明显的差异.植物细胞全能性表现根据细胞类型不同，其全能性表现从强到弱依次为 一个植物细胞向分生状态回复过程所能进行的程度，取决于它在自然部位上所处位置和生理状态。根据细胞所处的组织不同从强到弱： 顶端分生组织居间分生组织侧生分生组织薄壁组织（基本组织）厚角组织辅导组织厚壁组织 植物细胞全能性理论是植物组织培养的核心理论。离体细胞具有生命的特征属性，在全能性的基础上，提供合适的营养和环境条件，离体细胞经历脱分化和再分化过程，可形成再生植株。 细胞全能性细胞分裂脱分化个体再生再分化3、植物细胞物细胞全能性的实现途径 细胞全能性的表达是通过细胞脱分化和再分化实现的，在大多数情况下，脱分化是细胞全能性表达的前提，再分化是细胞全能性表达的最终体现。3.1 植物细胞的再分化分化：是指植物体各个部分出现异质性的现象，体现在细胞分化、组织分化、器官分化三个水平上。细胞分化：是指导致细胞形成不同结构或引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。细胞分化是组织分化和器官分化的基础，是离体培养再分化植株再生得以实现的基础。3.2 植物细胞的脱分化脱分化（去分化）：是指离体培养条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂，逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织，或成为未分化细胞特性的过程。愈伤组织：脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性、松散的细胞团称为愈伤组织。脱分化的机理 脱分化诱导期间会导致细胞膜透性改变，细胞核增大，内质网范围扩大，多核糖体形成，过氧化物酶增加，蛋白质和酚类物质合成活跃等。但目前对于脱分化的机理尚未完全阐明。 注意： a 并不是所有的细胞脱分化的结果都必然形成愈伤组织。有些植物体的细胞脱分化以后直接形成胚性细胞，进而形成体细胞胚；b 多数愈伤组织内的细胞并不都是未分化的细胞，即同一愈伤组织内的细胞之间其状态存在一定的差异。魔芋体细胞胚影响脱分化的主要因素（1）损伤：切割损伤的刺激，促使细胞增殖。 （2）生长调节剂：离体培养下的器官分化在大多数情况下是通过外源提供适宜的植物生长调节剂来实现的。种类、浓度和不同类型生长调节剂的比例是影响根、芽等分化的关键。 一般情况下,高的生长素/细胞分裂素浓度比的情况下，有利于根的的形成，反之有利于芽的形成。而当生长素和细胞分裂素含量相当时，有利于愈伤组织的生长。NAA（愈伤组织一定量）A B CA：NAA 0 mg/L，芽（多），根（无） B：NAA 0.1 mg/L，芽（多），根（无）C：NAA 5.0 mg/L，芽（少），根（多）BA（愈伤组织一定量）A BA：BA(0 mg/L) ，芽（减少），根（增多）B：BA(0.1 mg/L)，芽（增多），根（减少）（3）光照：弱光或黑暗条件有利于脱分化中的细胞分裂（即愈伤组织的诱导）。 （4）温度 ：愈伤组织诱导培养时，温度可以适当提高，而分化温度比诱导温度要低。（5）细胞位置：外植体本身的各类细胞可能对培养条件的刺激有不同的敏感性。（6）外植体的生理状态：不同生理年龄和不同季节都会有不同的培养反应。（7）植物种类的差异： 一般双子叶植物比单子叶植物及裸子植物容易。3.3 植物细胞的再分化 指是脱分化后的分生细胞（愈伤组织）在一定的条件下，重新分化为各种类型的细胞、组织、器官的，甚至形成完整植株的过程。 3.3 植物的形态建成 愈伤组织的形成 在细胞脱分化过程中，大多数情况下形成愈伤组织。愈伤组织的诱导形成是一个内、外环境因素相互