分子生物学 第四章 DNA的损伤与修复课件.ppt

2、碱基类似物、修饰剂对DNA的损伤 人工可以合成一些碱基类似物用作促突变剂或抗癌药物，如5-溴尿嘧啶（5-BU）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、2-氨基腺嘌呤（2-AP）等。由于其结构与正常的碱基相似，进入细胞能替代正常的碱基参入到DNA链中而干扰DNA复制合成，例如5-BU结构与胸腺嘧啶十分相近，在酮式结构时与A配对，却又更容易成为烯醇式结构与G配对，在DNA复制时导致A-T转换为G-C。 还有一些人工合成或环境中存在的化学物质能专一修饰DNA链上的碱基或通过影响DNA复制而改变碱基序列，例如亚硝酸盐能使C脱氨变成U，经过复制就可使DNA上的G-C变成A-T对；羟胺能使T变成C，结果是A-T改成C-G对；黄曲霉素B也能专一攻击DNA上的碱基导致序列的变化，这些都是诱发突变的化学物质或致癌剂。 4.2.2 DNA损伤的后果 上述损伤会最终导致DNA分子结构的变化，这种DNA分子水平上的突变(mutation)是基因突变的基础。 突变或诱变对生物可能产生4种后果：①致死性；②丧失某些功能；③改变基因型(genotype)而不改变表现型(phenotype)；④发生了有利于物种生存的结果，使生物进化。 4.3 DNA修复 DNA修复(DNA repair) 是细胞对DNA受损伤后的一种反应，这种反应可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能。 绝大多数的损伤或突变在DNA未复制前就被修复，保持遗传的稳定性。 生物体内存在多种修复机制，采用那一种修复机制对损伤的DNA进行修复，取决于DNA损伤的性质。 4.3.1? 回复修复 这是较简单的修复方式，一般都能将DNA修复到原样。 1.光修复　 这是最早发现的DNA修复方式。修复是由细菌中的DNA光复活酶来完成，此酶能特异性识别紫外线造成的核酸链上相邻嘧啶共价结合的二聚体，并与其结合，这步反应不需要光；结合后如受300－600nm波长的光照射，则此酶就被激活，将二聚体分解为两个正常的嘧啶单体，然后酶从DNA链上释放，DNA恢复正常结构。后来发现类似的修复酶广泛存在于动植物中，人体细胞中也有发现。 phR 471aa photo reactivation ----TT---- ----AA---- ----TT---- ----AA---- ----TT---- ----AA---- ----TT---- ----AA---- Before replication Error-free 400 nm Blue light phR gene (photo-reactivation enzyme) 可见光激活 2.单链断裂的重接　 DNA单链断裂是常见的损伤，其中一部分可仅由DNA连接酶(ligase)参与而完全修复。此酶在各类生物各种细胞中都普遍存在，修复反应容易进行。但双链断裂几乎不能修复。 3.碱基的直接插入　 DNA链上嘌呤的脱落造成无嘌呤位点，能被DNA嘌呤插入酶(insertase)识别结合，在K＋存在的条件下，催化游离嘌呤或脱氧嘌呤核苷插入生成糖苷键，且催化插入的碱基有高度专一性、与另一条链上的碱基严格配对，使DNA完全恢复。 4.3.2. 错配修复 Mismatch repair system DNA polymerase ligase MCE (mismatch correct enzyme) 3 subunits mutH, L, S dam gene m6A甲基化酶 Scanning 新生链中错配碱基 识别新生链中非 m6A 的GATC序列 酶切含错配碱基的新生DNA区段 MCE scanning DNA中的GATC(palindromic seq.) 为m6A甲基化敏感位点 平均每2kb左右有一GATC seq. 3’ -------C----------CTAG----------CTAG---- 5’ 5’ -----------T----------GATC----------GATC---- 3’ 3’ ------------------------------------------------------- 5’ 少 梯度 多（m6A）新生链 MCE scanning endonuclease Polymerase ligase GATC GATC CTAG CTAG T C GATC