分子荧光分析课件.pptVIP

;概述 分子荧光发光的机理 影响荧光发光的因素 定量分析方法 分子荧光分析法在医学检验中的应用;概述; 发光分析是受激物质分子或原子以发射辐射的形式释放能量，测量的是物质分子或原子自身发射辐射的强度，属于发射光谱法。 发光分析法包括荧光分析法，磷光分析，原子荧光分光光度法和化学发光分析。 分子吸收了光能而被激发到较高能态，在返回基态时，发射出与吸收光波长相等或不等的辐射，这种现象称为光致发光，分子荧光分析是基于这类光致发光现象而建立起来的分析方法。 ;分子荧光分析;;当处于基态单重态（S0）的分子吸收波长为λ1和λ2的辐射后,分别被激发到第一激发单重态（S1*）和第二激发单重态(S2*)的任意振动能级上,而后发生以下过程： ;激发光谱和荧光光谱:;影响荧光发光的因素 ;分子结构影响荧光发光;1 具有共轭双键体系的分子： 大多数荧光物质都具有芳香环或杂环，因为这些化合物都具有易发生π→π*或n→π*跃迁的电子共轭结构， π电子的非定域性越大，就越容易被激发，分子的荧光效率越大，因此凡能提高π电子共轭程度的结构，如对-苯基化、间-苯基化、乙烯化的作用都会增大荧光的强度。 2 苯环上取代基的类型： 给电子基团。如-OH、-NH2常使荧光增强。 与π电子体系互相作用较小的取代基。如-SO3H对分子荧光影响不明显。 吸电子基团如-COOH、-CO减弱甚至破坏荧光。 ;3 具有刚性平面结构的分子： 刚性的不饱和的平面结构具有较高的荧光效率，分子刚性及共平面性越大，荧光效率越高，酚酞和荧光素比较，荧光素中多一个氧桥，使分子的三个环成一个平面，其共平面性增加，使π电子的共轭度增加，因而荧光素有强烈荧光，而酚酞的荧光很弱。 ;环境对荧光的影响： 温度的影响：温度改变并不影响辐射过程，但非辐射去活的效率将随温度升高而增强，因此当温度升高时荧光强度通常会下降。 溶剂的影响：随溶剂极性的增加，荧光物质的π→π*跃迁几率增加，荧光强度将增加。溶剂粘度减小，可以增加分子间碰撞机会，使无辐射跃迁几率增加而使荧光强度减弱。若溶剂和荧光物质形成氢键或溶剂使荧光物质的电离状态改变，则荧光波长与荧光强度也会发生改变。 ; 溶液pH的影响： 当荧光物质是弱酸或弱碱时，溶液的pH对荧光强度有较大影响。因为弱酸或弱碱在不同酸度中，分子和离子的电离平衡会发生改变，而荧光物质的荧光强度会因其离解状态发生改变。以苯胺为例：在pH7~12的溶液中会产生蓝色荧光，在pH2或pH13的溶液中都不产生荧光。 ;定量分析方法;分子荧光分析法在医学检验中的应用;尿液中维生素B2的测定: 维生素B2（核黄素）在430~440nm蓝光照射下会发出绿色荧光，λem为535nm。它在pH6~7的溶液中荧光强度最大，而在pH11时荧光消失；但在碱性溶液经光线照射发生分解作用或在酸性KMnO4氧化下都会生成荧光强度比维生素B2强得多的黄光素，并可溶于氯仿。利用此性质可提高测定的灵敏度和选择性。 ;