风味甜瓜中柠檬酸代谢研究进展及RNA―seq技术应用现状.docVIP

风味甜瓜中柠檬酸代谢研究进展及RNA―seq技术应用现状 　　摘 要：随着人们生活水平的提高，兼具品质、营养和健康特征的甜瓜新品种――风味甜瓜应运而生，探索适度的风味甜瓜糖酸比非常重要，而目前对甜瓜果实中主要有机酸成分柠檬酸的代谢机制尚不清晰，因此，综述了风味甜瓜果实柠檬酸代谢特性的研究进展，并对利用RNA-seq技术分析甜瓜果实柠檬酸代谢关键基因的挖掘提出了一些展望。 　　关键词：风味甜瓜；柠檬酸；RNA-seq技术；基因挖掘；研究进展 　　中图分类号：S651 文献标识码：A 文章编号：1001-3547（2016）24-0040-05 　　甜瓜（Cucumis melo L.），葫芦科（Cucurbitaceae）甜瓜属（Cucumis）一年生蔓性草本植物。其果实通常呈球形或长椭圆形，果皮平滑，有纵沟纹；果肉白色、黄色或绿色，味美甘甜；含有丰富的蛋白质、维生素、烟酸、钙、铁等营养物质，是夏季常见的消暑瓜果之一，在果蔬生产和消费中占据着重要地位。2012年全国甜瓜播种面积达41万hm2，总产量高达1 330万t，已稳超麻类、烟草等经济作物，成为农业增产、农民增收的高效园艺作物（《全国西瓜甜瓜产业发展规划（2015-2020年）》；2014年，全国甜瓜播种面积达43.89万hm2，总产量达1 475.80万t（《中国农业统计资料（2014）》）。但是随着人们生活水平的提高，传统的高糖纯甜单一口味的甜瓜已不能满足人们的多样化需求，兼具品质、营养和健康特征的果蔬越来越受欢迎，糖、酸含量较高的甜瓜新品种――风味甜瓜因此问世。 　　外观、营养和风味是决定甜瓜品质的关键，而风味品质是消费者尤为追求的。甜瓜风味品质主要由可溶性糖和有机酸的含量决定，适当的糖酸比有助于果实风味品质的提升，产生最佳的口感[1]。因此，研究这2种物质的调控机制和代谢转化非常重要。研究表明，甜瓜品种不同，其果实内可溶性糖的成分和含量有差异，早熟甜瓜品种，由于生育期短，光合产物提前进入果实，因此其可溶性糖的主要成分是果糖和葡萄糖；中晚熟甜瓜品种，果实发育前期可溶性糖主要成分是果糖和葡萄糖，后期主要是蔗糖[2]，而总糖、果糖、葡萄糖和蔗糖含量均受主基因和多基因控制[3]；甜瓜果实中可溶性糖的积累主要发生在果实发育的中后期，其与蔗糖磷酸合成酶和酸性转化酶的活性有关，若合成酶活性升高而转化酶活性降低，糖分就会不断积累[4]。除此之外，温光因子也会影响糖分含量的积累，如日温差积累对果实总糖含量有影响，有效积温积累对果实葡萄糖含量有影响，而有效辐射积累对果实果糖和蔗糖含量均有影响[3]。 　　有机酸成分和含量也是影响果实风味品质的主要因素，其成分以柠檬酸为主，还包括苹果酸、琥珀酸等。研究表明，甜瓜中有机酸积累的遗传多态性较低；此外，日温差积累对果实总酸、柠檬酸、苹果酸含量影响较大[3]，而在目前研究中对于调控柠檬酸代谢的调控机制还不是特别清晰，其分子标记方面的研究也较少[5]，挖掘的关键基因也比较少，因此，运用RNA-seq技术研究甜瓜果实中柠檬酸代谢特性，并挖掘其中主要的调控基因，对提高甜瓜果实柠檬酸的含量具有重要作用。 　　1 柠檬酸代谢途径研究进展 　　葡萄糖经过三羧酸循环生成丙酮酸，丙酮酸主要有两方面的去处，一是在丙酮酸脱氢酶的作用下氧化脱羧生成乙酰CoA（乙酰辅酶A），二是在丙酮酸羧化酶的作用下羧化生成草酰乙酸，最后草酰乙酸和乙酰CoA在柠檬酸合酶的作用下缩合生成柠檬酸。Lobit等[6]利用依赖于简化的线粒体三羧酸循环表示的柠檬酸代谢模型预测了果实快速生长期柠檬酸的含量，该模型仅考虑了三羧酸循环的3个中间体（柠檬酸、苹果酸和丙酮酸），并假设2个组分之间的流动仅受酶活性、温度、初始浓度、目标组分浓度的影响，结果发现，三羧酸循环产生的CO2被呼吸作用同化后，在细胞质和线粒体之间的流动除了受温度和酶活性影响外，主要受两区室之间的浓度梯度影响[3]。 　　1.1 风味甜瓜中的柠檬酸代谢 　　经过前人的研究可以看出，风味甜瓜果实中的有机酸主要是柠檬酸[7，8]，其含量占果实鲜质量的1.0%，而传统甜瓜仅为0.2%[9]。研究表明，甜瓜中有机酸含量由主基因和多基因控制，而柠檬酸合成酶、乙烯、Ca2+-CaM信号系统这3类基因的上调表达均与柠檬酸积累有关[3]。汤谧[9]以风味3号甜瓜为研究对象，发现PEPC（柠檬酸合酶）、CS（丙酮酸羧化酶）、IDH（异柠檬酸合酶）和MDH（苹果酸脱氢酶）这4种酶活性变化与柠檬酸含量的变化呈显著相关。可见，在植物细胞中，柠檬酸的积累不是单一的某一生化反应的结果，而是一系列生理过程的综合结果。 　　1.2 其他园艺作物中的柠檬酸代谢 　　柠檬酸代谢特性在柑橘类研究中已比较成熟。孙琦[10]指出柠檬酸降解有2条途径：一