重组猪源胰蛋白酶原的构建表达与活性分析.PDF

PROGRESS IN PHARMACEUTICAL SCIENCES 2014,38 12 :916-921 916 ( ) ·药学研究· P H A R M A C E U T I C A L R E S E A R C H 重组猪源胰蛋白酶原的构建、表达与活性分析 1,2 2 2 1 3 1 1* 冯雪婷 ，刘素丽 ，黄潇 ，王云康 ，龙军 ，金亮 ，曹荣月 （1. 中国药科大学生命科学与技术学院，江苏 南京210009；2. 江苏未名生物医药有限公司，江苏 常州 213000 ；3. 南京中医药大学生命 科学与技术学院，江苏 南京 210046） [ 摘要 ] 目的：构建、表达重组猪源胰蛋白酶原，并对其进行分离纯化和酶活性分析。方法：利用大肠埃希菌表达系统（pET-28a，宿主菌 BL21 DE3）优化天然猪源胰蛋白酶原基因，经乳糖诱导表达重组胰蛋白酶原蛋白，采用阴离子交换色谱法分离纯化，以SDS电泳 鉴定目标蛋白，以紫外分光光度法检测重组蛋白的酶活力。结果：测序结果表明，重组猪源胰蛋白酶原基因工程菌构建成功，SDS 检测显示目的蛋白条带位置与标准猪源胰蛋白酶条带位置一致，且酶活力可达513.09 U•mg-1。结论：成功获得了重组猪源胰蛋白酶原， 且酶活力较好，为进一步研究生产提供了基础。 [ 关键词 ] 猪源胰蛋白酶原基因；包涵体变性；乳糖诱导；稀释复性 + [ 中图分类号 ] Q556 .3 [ 文献标志码 ] B [ 文章编号 ] 1001-5094（2014）12-0916-06 Cloning and Expression of Porcine-recombination Trypsinogen Gene and Its Activity Analysis 1,2 2 2 1 3 1 1 FENG Xueting , LIU Suli , HUANG Xiao , WANG Yunkang , LONG Jun , JIN Liang , CAO Rongyue ( 1.School of Life Science and Technology, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China; 2.Js Bioway Pharmaceutical Co., LTD,Changzhou 213000, China; 3. School of Life Science and Technolog, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210046, China) [Abstract] Objective: To optimize and express the gene of recombinant porcine trypsinogen, and to detect the specific activity after purification. Methods: The aynthetic porcine-recombination trypsinogen gene, of which the rare codon was substituted, was inserted into pET28a and then transformed into E.coli BL21(DE3). Porcine-recombination trypsinogen was obtained in the inducement of lactose. The target prote