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Livinα基因多态性和膀胱癌易感性研究 　　[摘要] 目的 探讨研究凋亡抑制基因Livin-α与膀胱癌的易感性关系。 方法 采用逆转录PCR方法扩增Livin-α基因片段，并对扩增产物进行测序分析，经过比对之后统计分析膀胱癌患者中Livin-α等位基因的数量和出现的频率。根据Livin-α不同的等位基因与患者肿瘤临床分期、病理分级等进行统计学分析。 结果 80例膀胱癌患者中Livin-α基因的阳性率为55.0%，对照组组织中Livin-α基因的阳性率为1.5%，二者差异有统计学意义。从所有患者的Livin-α基因测序结果中共发现3种等位基因，统计分析结果表明Livin-αⅠ、Ⅱ和Ⅲ等位基因与患者的肿瘤临床分期和病理分级有统计学意义，而与年龄、性别等因素无统计学意义。 结论 Livin-α基因在膀胱癌的发生发展中具有重要意义，并且Livin-α等位基因Ⅰ和Ⅱ在较严重的膀胱癌患者中具有意义。 　　[关键词] Livin-α基因；多态性；膀胱癌 　　[中图分类号] R737.14 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）08（b）-0015-03 　　膀胱癌是常见的泌尿生殖系统恶性肿瘤之一，在我国较为多发。目前的研究表明，癌症的发生、发展是一个多因素、多阶段的逐步发展的过程，其中涉及到原癌基因、抑癌基因以及其他生物大分子的激活与失活过程，多个因素的共同作用最终导致癌症的产生[1]。膀胱癌的遗传易感性与人体内多个基因的表达有关，例如：代谢酶基因、DNA修复酶基因等[2]。 　　Livin是一个人类凋亡抑制蛋白，是一种重要的抗细胞凋亡因子，与肿瘤的发生、发展密切相关。Livin定位于人类20号染色体的q13.3，包含了7个外显子和6个内含子，基因全长为46kb，其mRNA的转录产物有两种，即分别编码298个AA的Livin-α和编码280个AA的Livin-β，其抗细胞凋亡的机制主要是通过抑制caspase蛋白酶途径获得的[3]。研究表明，Livin-α在人类的膀胱癌中具有高表达，而Livin-β则从来没有检出的报道[4]。现有的研究主要涉及Livin基因的表达与膀胱癌之间的联系，几乎没有Livin基因多态性与膀胱癌易感性的关系的报道。为此，本研究对膀胱癌患者的Livin-α基因进行测序和比对分析，以阐明其基因多态性与膀胱癌易感性之间的关系。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　研究对象为2010年1月～2012年10月内蒙古医科大学附属医院泌尿外科收治的膀胱癌患者80例，其中男46例，女34例，患者平均年龄为（55.4±5.8）岁。所有患者均经组织病理诊断为膀胱癌。80例膀胱癌患者将其作为病例组，其组织病理分级（WHO）为：G1 19例，G2 25例，G3 36例；患者的临床分期（TNM）为：T0～T1为38例，T2～T4为42例。选取同时期于内蒙古医科大学附属医院进行泌尿生殖系统疾病检查的，排除膀胱癌并留取患者血液标本的患者为对照组，共计60例，其中男33例，女性27例，平均年龄为（60.4±3.7）岁。病例组与对照组的性别、年龄比较差异无统计学意义（P 0.05），具有可比性。 　　1.2 DNA样本的提取 　　病例组和对照组所有对象均抽取静脉血10 mL，经过抗凝处理之后，采用QINGEN（德国）血液和组织DNA提取试剂盒提取所有对象的DNA样本，严格按照试剂盒的操作说明进行操作，并将DNA样本保存于-20℃。 　　1.3 基因检测 　　根据文献报道合成引物[5]，序列为：上游5’ -CTGGTCAGAGCCAGTGTTCC-3’，下游引物5’ -TCATAGAAGGAGGCCAGACG-3’，扩增产物片段大小为311 bp。采用Taq Premix预混液（TaKaRa），引物的退火温度为60℃，扩增体系为20 μL，共计35个循环。 　　扩增阳性的标本将阳性扩增产物送TaKaRa公司进行测序，测序采用双向测定。测序结果用DNAStar软件进行拼接，并用MEGA4软件进行比对分析。 　　1.4 统计学分析 　　采用SPSS 16.0对检测结果进行统计学分析，定性变量采用χ2检验，P0.05认为差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 病例组与对照组Livin-α基因比较 　　病例组中经PCR检测有44例患者的Livin-α基因为阳性，其余36例检测为阴性，阳性率为55.0%；对照组中有1例研究对象为阳性，其余59例全部为阴性，阳性率仅为1.5%。经统计学分析表明， 携带Livin-α基因与膀胱癌的发生具有统计学意义（P 0.05），见表1。 　　2.3 Livin-α基因多态性与膀胱癌易感性 　　将44例Livin-α基因阳性患者的不同等位基