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啮齿类小鼠γ－干扰素原核表达纯化及功能鉴定-中国科技论文在线
中国科技论文在线
年 月第 卷第 期
2008 1 5 1 ·论著·
啮齿类小鼠 γ-干扰素原核表达、纯化及功能鉴定
刘小会,陈卓佳,杜 军*
(中山大学药学院微生物与生化制药实验室,广东广州 )
510080
摘要 目的:构建 干扰素的高效原核表达载体,进行 干扰素表达、纯化和鉴定,并探索优化啮齿类 干扰素
[ ] γ- γ- γ-
的制备工艺。方法:用RT-PCR技术,从ConA活化的小鼠脾细胞中扩增出mIFN-γcDNA,与原核表达载体pET30a
重组,表达和纯化重组蛋白 ,并用 检测该重组蛋白的生物学活性。结果:构建了啮齿类
(+) His-mIFN-γ WesternBlot
6
干扰素的高效原核表达载体,并实现了 干扰素的可溶性表达,且验证该 干扰素具有生物学活性。结论:成
γ- γ- γ-
功优化了生产干扰素的工艺,为国内外进行 干扰素研究奠定基础。
γ-
关键词 干扰素;原核表达;纯化
[ ]γ-
中图分类号 文献标识码 文章编号 ( ) ()
[ ]TQ929+.1 [ ]A [ ]1673-7210200801a-011-03
Prokaryoticexpressionandpurificationofmurineinterferon-gamma
LIUXiao-hui,CHENZhuo-jia,DUJun
,
(DepartmentofMicrobiologyandBiopharmaceuticsinSchoolofPharmaceuticalSciences,SunYat-senUniversityGuangzhou
,
510080China)
[Abstract]Objective:Toclonemurineinterferon-gammagene,doeffectiveprokaryoticexpressionandpurifyrecombinant
murineIFN-γforfurtherstudy.Methods:ToamplifymIFN-γcDNAfromConA-activatedmurinesplenocytesbyRT-PCR
2+
andcloneintopET30a(+)vector.ThenthetargetproteinHis-mIFN-γwasinducedbyIPTGandpurifiedwithNi-NTA
6
agarose.Thebiologicactivit
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