一株薄荷抑菌内生菌鉴定和抑菌活性分析.docVIP

一株薄荷抑菌内生菌鉴定和抑菌活性分析 　　摘要 从薄荷里筛选出一株具有抑菌活性的内生细菌（命名为BH2），通过对菌株进行形态学观察和16S rDNA序列分析，表明该菌株属于解淀粉芽孢杆菌。抑菌试验结果表明，该菌株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、未知霉菌均有抑菌活性。 　　关键词 薄荷；内生细菌；解淀粉芽孢杆菌；抑菌活性 　　中图分类号 S681.9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）17-0068-02 　　Identification and Antibiotic Activity of an Endophytic Bacterium in Mentha haplocalx Briq 　　ZHANG Yan-cui XIE Qiu-jiao ZHU Wei-ping CHEN Dong-hong * 　　（School of Bioscience and Biotechnology，Hunan Agricultural University，Changsha Hunan 410128） 　　Abstract An endophytic bacterium named BH2 with antibiotic activity from Mentha haplocalx Briq was screened.Morphological observation and 16S rDNA sequence analysis indicated that BH2 belong to Bacillus amyloliquefaciens.Antimicrobial experiments showed BH2 can inhibit the growth of Escherichia coli，Bacillus subtilis，Staphylococcus aureus and an unknown fungus. 　　Key words Mentha haplocalx Briq；endophytic bacterium；Bacillus amyloliquefaciens；antibiotic activity 　　薄荷（Mentha haplocalx Briq）为唇形科一年生药食两用植物，其挥发油经加工后得到的薄荷脑等被广泛地应用于医药、食品、化妆品、香料、烟草等工业，具有巨大的经济价值[1]。最近研究发现，薄荷对治疗癌症有特殊功效，薄荷油还具有一定的抗菌活性，其内生真菌在长期的进化中通过基因交流，代谢产物也具备一定的抑菌效果，作为生物抑菌剂具有巨大的开发潜力。 　　植物内生细菌（endophyte）是指定殖在健康植物组织内，并与植物建立和谐联合关系的一类微生物[2]。随着对其深入的研究，国内外一些?W者发现，定殖后的内生细菌可起固氮作用，可分泌植物促生物质，对病虫害起生防作用。引起了微生物学家、生态学家、植病学家的广泛兴趣，近年来成为国内外研究的热点之一[3]。自1993年以来，人们从多种药用植物中陆续分离出产生活性物质的内生菌，药用植物内生菌已成为人们寻找新型骨架化合物药物的重要来源，并具有不可替代的优势[4]。 　　近几年，国内外对薄荷内生菌的研究主要是内生真菌方面，集中研究的有薄荷内生真菌的多样性及组分的分析、内生真菌对薄荷自身生长、挥发油、精油的影响以及生物防治作用等[5]。此外，薄荷内生细菌仅仅在种类多样性的探究，在生物防治方面的研究很少，而生物防治与人类生活、健康及环境保护息息相关[6]。细菌较真菌繁殖周期短，实验周期短，若能筛选出抑菌性较好的薄荷内生细菌，分离其代谢产物和次生代谢产物，并对活性物质进行筛选鉴定，可能在生物防治方面会有一定的突破。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　薄荷采自湖南农业大学校园内。抑菌试验用敏感指示菌：大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus sub-tilis）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、未知霉菌。培养基：LB固体培养基。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 内生菌的分离与纯化。按常规的无菌操作方法，用组织分离法取薄荷新鲜叶及幼嫩茎，按下列程序表面消毒：自来水冲洗后先后经70%酒精漂洗30 s，0.6%过氧化钠漂洗5 min，无菌水冲洗3～5次。将经过处理的样品在无菌条件下切割成小块，接种于PDA固体培养基上；一部分切割的小块在灭菌的研钵中进行研磨并加1 mL水混匀，取适量于LB培养基中并涂布均匀。每种培养基设3个平行组，以最后一次清洗无菌水作对照，于28 ℃温箱倒置培养1周。 　　1.2.2 抑菌性内生菌的筛选。①平板对峙培养法。针