过表达内源PMT和H6H基因对颠茄发根托品烷类生物碱-药学学报.PDF

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 13, 48 (2): 243 249 ·243 · 过表达内源PMT 和H 6H 基因对颠茄发根托品烷类生物碱合成的影响 1 1 1 1 2 1* 龙世平 , 卢 衍 , 王亚雄 , 杨春贤 , 兰小中 , 廖志华 ( 1. 西南大学生命科学学院, 重庆市甘薯工程技术研究中心, 重庆 4007 15; 2. 西藏农牧学院生物技术教研室, 西藏 林芝 860000) 摘要: 颠茄是我国药典规定的托品烷类生物碱包括东莨菪碱和莨菪碱最主要的商业栽培的药源植物。本研究 采用基于发根的基因表达系统, 农杆菌介导遗传转化颠茄, 潮霉素筛选获得转颠茄自身PMT 和 H 6H 基因发根; 基因组PCR 鉴定转基因发根; 液体摇 培养后, HPLC 测量莨菪碱和东莨菪碱含量; qPCR 检测颠茄PMT 和H 6H 基因表达水平。基因组PCR 检测获得5 个双基因共转化颠茄发根系, 其中2 个发根系 (PH2 和PH 14) 的总生物 碱含量得到显著提高, 最高的PH2 总生物碱含量为非转基因发根的2.7 倍; 另外3 个转基因发根系总生物碱含量 与对照相比没有显著性差异。4 个转基因发根系 (PH2 、PH32 、PH 14 和PH20) 东莨菪含量都有提高, 其中PH2 东莨菪碱含量比对照提高了8.2 倍。基因表达量与生物碱含量结果基本一致, 说明颠茄发根中PMT 和H 6H 两者 同时维持高水平表达可以极大程度的促进东莨菪碱积累。 关键词: 东莨菪碱; 颠茄; N- 甲基 腐胺 转移酶; 莨菪碱6 -羟化酶 中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 05 13-4870 (20 13) 02-0243-07 Enhancement of tropane alkaloids production in transgenic hair roots of Atrop a belladonna by overexpressing endogenous genes AbPMT and AbH6H 1 1 1 1 2 1* LONG Shi-ping , LU Yan , WANG Ya-xiong , YANG Chun-xian , LAN Xiao-zhong , LIAO Zhi-hua (1. Chongqing Eng ineering and Technology Centerf or Sweetp otato, School of Life Sciences, Southwest University, Chongqing 400715, China; 2. Dep artment of Biotechnology, Tibet Agricultural and Animal Husbandry College, Ny ingchi 860000, China) Abstract: A trop a belladonna L.