结核杆菌涂片检查标准操作程序.doc

月亮县 中医院 项 目 文件编号：YCXZYYJYK_SOP_15 页码：第 4 -页，共 NUMPAGES 4页 检验科 临床微生物项目SOP手册 版本：第3版，第1次修订 生效日期PAGE 编写者：张三三 审核者：李四四 批准者：李四四 时 间时 间时 间SOP_15-16 结核杆菌涂片检查标准操作程序 一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。 二、适用范围：结核杆菌涂片检查 三、操作人员：检验科授权工作人员 四、操作步骤： 原理 抗酸染色的基本原理是抗酸菌具有耐受酸性介质脱色的生物性状。此类细菌在石碳酸（苯酚）的协同作用下，被复红染色剂着色，能够耐受酸性乙醇脱色，显微镜观察时保持紫红色；而其它脱落细胞或标本中的非抗酸菌被酸性乙醇脱色后，可被复染剂亚甲蓝染为蓝色。 染色液的配制 2.1碳酸复红染液：全省统一配送 2.2 5%盐酸乙醇脱色液： 35%浓盐酸5mL与95%乙醇混合 2.3亚亚甲蓝染色液：全省统一配送 载玻片的准备： 用于AFB检查的载玻片要求： ⑴ 一张载玻只能涂抹一份痰标本。 ⑵ 每张载玻片只能使用一次，不得清洗后再次用于AFB涂片检查。新的载玻片放入95%乙醇中浸泡2小时脱脂，用摄子夹出放干净纱布上阴干，放无尘容器（培养皿）中备用。 本的采集、运送及处理 4.1初诊病人应送3份痰标本（夜间痰、晨痰和即时痰）。如无夜间痰，在留晨痰后2-3小时再留取一份痰标本；或在送痰时，留取两份即时痰。疗程中或复诊随访病人按期每次送检2份痰（晨痰和夜间痰）。痰标本性质：干酪痰、血痰、粘液痰为合格标本；唾液或口水为不合格标本，除照常进行涂片检查外，应要求患者重新送检。 4.2收集标本的容器应采用WHO推荐的标准痰瓶，或采用直径4厘米、高2厘米的可密封塑料盒或蜡纸盒（我省统一采用蜡纸盒）。★痰容器上就注明与检验单一致的病人姓名、编号（初诊病人门诊序号或随访病人登记号）、★检查项目和容器序号1、2、3（1为当日即时痰，2为夜间痰。3为晨痰）。 5、涂片的制备 5.1 编号： 取经干燥、清洁、无油污、无划痕的新载玻片制备涂片，在玻片背面左端1/3处注明实验室序号(56001递增)及标本序号（按1递增）（如使用的载玻片一端无磨砂面，须用玻璃刻刀注明编号；如使用的载玻片一端有磨砂面，可用2B铅笔在磨砂面上直接书写）。 5.2制备涂片 小心打开装盛痰标本的容器，防止产生气溶胶或使标本外溢。仔细观察标本，使用折断的竹签茬端，挑取痰标本中干酪样、脓样或可疑部分约0.05-0.1ml，于玻片正面右侧2/3处均匀涂抹成10mm×20mm的卵圆形痰膜（新版一角硬币大小）。痰膜朝上静置，自然干燥后（一般约30min）进行染色镜检。 ★涂抹完毕后的痰标本，在报告结果前应暂时保留。 ★为保证检验人员的安全，严禁在涂抹痰标本的同时对载玻片进行加热。 5.3染色： 萋—尼氏染色步骤 ⑴ 涂片自然干燥后，放置在染色架上，玻片间距保持10mm以上的距离；火焰固定（在5秒钟内将玻片置于火焰上来回烤4次）。 ⑵ 滴加石碳酸复红染液，盖满痰膜，火焰加热至出现蒸汽后，脱离火焰，保持染色5分钟。染色期间应始终保持痰膜被染色液覆盖，必要时可续加染色液。加温时勿使染色沸腾。 ⑶ 流水自玻片一端缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余的水。 ⑷ 自痰膜上端外缘滴加脱色剂布满痰膜，脱色1分钟；如有必要，需流水洗去脱色液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止。 ⑸ 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去脱色液，沥去玻片上剩余的水。 ⑹ 滴加亚甲蓝复染液，染色30—60秒钟。 ⑺ 流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去复染液，然后疬去标本上剩余的水，待玻片干燥后镜检。 一张染色合格的玻片，由于被亚甲蓝染色而呈亮蓝色。将染色后的玻片放置在报纸上，如果透过痰膜不能分辩报纸上的文字，表明该玻片涂抹过厚。 5.4镜检读片: 萋—尼氏染色玻片镜检 使用10X目镜双目显微镜读片。取染色完毕且已干燥的玻片，痰膜向上放置在玻片台上并以卡尺固定。首先使用40X物镜，转动卡尺移动玻片至痰膜左端，将光线调节至适当亮度，调节焦距至可见细胞形态；移开40X物镜，在玻片上滴1-2滴镜油，使用100X油镜进行细致观察。在淡蓝色背景下，抗酸菌呈红色，其他细菌和细胞呈蓝色。为防止AEB交叉感染，严禁油镜镜头直接接触玻片上的痰膜。 读片时，首先应从左向右观察相邻的视野，当玻片移动至痰膜一端时，纵向向下转换一个视野，然后从右向左观察，依此类推。通常10mmX20mm的痰膜，使用100X油镜，每行可观察100个视野。 仔细观察完300个视野，一般需要5分钟以上。一位镜检人员连续阅读10—12张玻片后应休息约20