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ATP生物发光原理及的应用的研究 　　[摘要] ATP生物发光是一种快速的微生物检测方法,具有灵敏、快速、简便、稳定等优点,本文就其原理、特点及在食品卫生、医药中的应用进行了综述。 　　[关键词] ATP;应用;生物发光原理 　　[中图分类号] R319[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)04(c)-012-03 　　 　　Research on bioluminescent theory and applying of ATP 　　HOU Ying1, WU Xueqiong2, WANG Xinghua3* 　　(1.Biological Technology Research Institution of Shanxi University, Taiyuan 030001, China; 2.The Tuberculosis Resesch Institution of 309 Military Hospital of China, Beijing 100091, China; 3.The Institution of Life Science and Technology of Shanxi University, Taiyuan 030001, China) 　　[Abstract] As a fast detecting method of microorganism, ATP bioluminescence has the advantages of sensitivity, high-speed, convenience and stability and so on. The article summarizes its principles, characteristics and application to food hygiene and medicine. 　　[Key words] ATP; Application; Bioluminescent theory 　　 　　生物发光(bioluminescence)在希腊语中表示活着的意思,在拉丁语中表示发光、发亮。目前生物发光,应用最广最主要的是荧光素-荧光素酶反应发出的荧光,荧光素酶存在于萤火虫、水母和一些细菌中,它是生物体内产生的一种生物反应蛋白质[1]。 　　三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,简称ATP)是高能磷酸化合物。ATP由一分子腺嘌呤、一分子核糖和三个相连的磷酸基团构成的核苷酸,其结构式见图1。 　　 　　图1 三磷酸腺苷的结构式 　　Fig.1 Adenosine triphosphate 　　 　　ATP存在于所有的有机体中,极易被储存和利用,是活细胞新陈代谢能量的源泉,在化学反应中,主要是通过释放磷酸基团从而达到释放能量的目的。 　　1 ATP生物发光工作原理 　　1963年McElroy[2]最先用荧光素酶-ATP检测法,其化学反应的结果是把化学能转化为光能。1983年Moyer等提出细胞内源性的ATP含量可以反应活细胞的数量和活性。其化学反应如下: 　　 ATP+D-Luciferin+O2→Oxyluciferin+AMP+PPi+O2+Light 　　当细胞受损或死亡时,其ATP值迅速下降或消失,基于这一原理,检测细胞内的ATP含量,即可反应其细胞的存活状况,ATP浓度与活细胞数密切相关,ATP生物发光检测步骤包括:取样、样品ATP的提取、添加荧光素-荧光素酶、测定生物发光值、计算出ATP的浓度和活菌数量。检测时先将ATP与提取剂充分混合,使细胞壁和细胞膜裂解,释放ATP,再加入荧光素-荧光素酶,ATP在荧光素和荧光素酶的作用下,使其释放磷酸基团同时发出荧光,用生物荧光仪检测相对荧光强度(relative light units,RLU),由此测出ATP的含量,进而反映活细胞数。这项技术高度敏感,只需50个细胞就能测出ATP 的量,而且,当ATP含量为105～1 012 mol/L时,活细胞的对数值与ATP发光值的对数值之间存在良好的线性关系[3-5]。 　　2 ATP生物发光特点 　　2.1 ATP生物发光优点 　　灵敏、快速、简便、稳定是ATP生物发光的主要优势所在,同时可以把ATP数量化,用荧光强度(RLU)把光定量,广泛应用于食品工业、医药、生物学等领域。 　　2.2 ATP生物发光法的不足 　　荧光强度(RLU)和菌落形成单位(CFU)之间没有直接关系,也无法对细菌的种属进行鉴定。有的学者设想通过测定ATP/CFU的大小来预测样品中所含菌种类别,如果ATP/CFU较小,提示样品中可能主要含有形态较小的孢子或G-