156例儿童急性白血病免疫分型的研究.docVIP

156例儿童急性白血病免疫分型的研究 　　[摘要]　目的　研究儿童急性白血病免疫分型特点，了解儿童急性白血病抗原表达规律和免疫亚型分布情况。　方法　采用CD45/SSC双参数设门方法的三色流式细胞术检测白血病细胞膜表面及胞浆内分化抗原。　结果　156例儿童急性白血病免疫可分为4类：未分化型占0.7%，急性淋巴细胞白血病69.2%，急性髓细胞白血病25%，急性混合型白血病5.1%。108例儿童ALL中，B淋巴细胞白血病（B-ALL）占90.7%，T淋巴细胞白血病占9.3%，CD10、CD19、CD20在B-ALL中表达较高，阳性率分别为83.5%、98.9%、21.6%。CD13、CD33、CD117、胞浆内MPO在AML各亚型中有较高的表达率，阳性率分别为94.8%、94.8%、67.6%、86.5%，AML-M3患者CD34及HLADR呈低表达，均明显低于其他髓系白血病，差别有统计学意义（P　＜　0.05）。　结论　免疫分型技术在儿童急性白血病患者诊断中具有重要意义，是骨髓形态学诊断的有力补充。 　　[关键词]　儿童急性白血病；免疫分型；流式细胞术 　　[中图分类号]　R733.71 [文献标识码]　B [文章编号]　1673-9701（2012）36-0096-03 　　白血病免疫分型是利用流式细胞仪检测与荧光标记的单克隆抗体特异性结合的白血病细胞表面或胞浆内抗原的方法，能够更细致地分析正常和恶性细胞系列来源，分析被测细胞的分化阶段，从而有助于临床分型、指导治疗及判断预后的重要手段，弥补了传统的白血病骨髓常规检查的不足，是对细胞形态学诊断急性白血病（acute　leukemia，AL）的重要补充。本研究回顾性分析2008年1月～2012年6月入住我院的156例初发儿童急性白血病患者免疫分型结果，现报道如下。 　　1　对象与方法 　　1.1　研究对象 　　2008年1月～2012年6月在温州医学院附属第二医院儿童血液科初诊的急性白血病患者156例，男93例，女63例，中位年龄6岁（1个月～16岁）。所有病例均按《白血病诊断及疗效标准》[1]确诊。 　　1.2　仪器与试剂 　　所用仪器为美国BD公司生产的FACS　CantoⅡ流式细胞仪，单克隆抗体均为BD公司生产，包括T淋系标记CD2、CD3、CD4、CD5、CD7，B淋系标记CD10、CD19、CD20，髓系标记CD13、CD14、CD15、CD33、CD117、胞浆内MPO，干/祖细胞标记HLADR、CD34等。 　　1.3　方法 　　所有标本均为肝素抗凝的骨髓液，据骨髓增生情况取骨髓液10～50　μL，调细胞浓度为1×106/L。取BD流式试管11只，每管分别加入相应的单克隆抗体10　μL、CD45-PE-Cy5　5　μL，室温暗室反应30　min，加入溶血剂1　mL，室温静置15　min，500　g离心5　min，弃上清，加入PBS缓冲液使细胞终浓度在1×106/L左右，上机测定。采用CD45/SSC双参数设门方法检测，结果用FACS　Diva　Software分析软件。 　　1.4　结果判读 　　T淋系标记以≥30%为阳性；B淋系标记及髓系标记以≥20%为阳性，胞浆内MPO以≥10%为阳性。 　　1.5　免疫表型判断标准 　　根据欧洲白血病免疫学分型研究组（EGIL）[2]提倡的抗原积分系统分为未分化型、单纯型、变异型、混合型。 　　1.6　统计学方法 　　采用SPSS　13.0软件分析，率的比较用χ2检验，P　＜　0.05为差异有统计学意义。 　　2　结果 　　2.1　白血病免疫分型情况 　　156例儿童AL患者免疫分型中，ALL　108例（69.2%），其中B-ALL　98例（90.7%），T-ALL　10例（9.3%），AML　39例（25%），急性混合细胞性白血病8例（5.1%），未分化型1例（0.7%）。 　　2.2　ALL患者抗原表达情况 　　按照急性混合细胞白血病诊断积分系统（EGIL，1994），表1中B-ALL患者其CD10、CD19、CD20阳性率分别为83.5%、98.9%、21.6%，以CD19最高，T-ALL患者CD2、CD3、CD5、CD7阳性率分别为72.7%、18.2%、90.9%、100%，以CD7阳性率最高，伴髓系抗原ALL患者中CD13、CD33阳性率分别为87.6%、9.3%。见表1。 　　2.3　儿童AML组患者髓系及造血干/祖细胞标记抗原表达情况 　　由表2可知，39例儿童AML患者CD13、CD33、CD117、cMPO阳性率分别为94.9%、94.9%、64.1%、86.5%；cMPO在M2、M3、M4、M6中表达率较高，分别为100%、100%、90%、100%，而在