4种煎煮的方法下大黄中没食子酸含量及小肠推进的作用比较的研究.docVIP

4种煎煮的方法下大黄中没食子酸含量及小肠推进的作用比较的研究 　　[摘要]目的 探讨不同煎煮时间下大黄水煎液中没食子酸的含量及对小鼠小肠推进作用。 方法 采用HPLC法测定水煎液中没食子酸的含量，采用墨汁推进度试验考察它们对小鼠小肠的推进作用。 结果 煎煮时间越长，没食子酸含量越高；与空白对照组相比，生大黄煎煮15 min及25 min的水煎液对小鼠小肠推进作用显著（P0.05），生大黄煎煮35及45 min的水煎液对小肠无显著推进作用。 结论 大黄水煎液中没食子酸含量越高，其对小鼠小肠的推进作用越弱；生大黄煎煮15～25 min的水煎液对小鼠小肠推进作用最好。 　　[关键词]大黄；煎煮；没食子酸含量；小肠推进作用 　　[中图分类号] R283.4 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）12-46-03 　　大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根和根茎，具有泻下攻积，清热泻火，逐瘀通经等功效。大黄中主要化学成分有鞣质类成分、双蒽酮类成分及游离、结合型蒽醌类成分[1]等。生大黄泻下作用峻烈，其中鞣质类代表性成分为没食子酸（gallic acid），具有止血收敛等多种药理活性[2-3]。本研究首先制备4种不同的生大黄水煎液，并采用HPLC法测定各水煎液中没食子酸的含量，然后用墨汁推进度试验考察它们对小鼠小肠的推进作用，以期为大黄的临床合理应用提供科学依据。 　　1 仪器与材料 　　1.1 仪器 　　Waters高效液相色谱系统；AUW220D电子分析天平（日本岛津公司）；UPT优普系列超纯水器（成都超纯科技有限公司）；KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。 　　1.2 材料 　　药品及试剂：生大黄（购自湖北天济中药饮片公司）；没食子酸标准品（购自中国药品生物制品检定所，批号：110831-200803）；乙腈（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司），其他试剂均为国产分析纯，试验用水为超纯水。 　　试验动物：清洁级昆明种小鼠，共30只，8周龄，体重18～22 g，雌雄各半，购自华中科技大学实验动物中心，动物生产许可证号：SCXK（鄂）2010-0009，编号：2013-006。 　　2 方法与结果 　　2.1 生大黄水煎液的制备方法[4] 　　取适量水，加热煮沸后备用。再取等量的生大黄药材4份，各自称重后，分别加药材量3倍量的沸水，分别继续煎煮15、25、35、45 min，趁热过滤后留存滤液。将上述水煎液分别用适量水定容至50 mL容量瓶中，使其含量均为含生药量0.09 g/mL，密闭后，置于干燥阴凉处备用。 　　2.2 大黄水煎液中没食子酸的含量测定方法[4-5] 　　2.2.1 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱：Inertsil ODS-3 C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相：乙腈?0.1%磷酸=10?90（v/v），检测波长：272 nm，柱温：25℃，流速：0.8 mL/min，进样量：10μL，样品室温度：4℃。理论塔板数按没食子酸峰计算应不少于3000。在此色谱条件下，样品及标准品溶液的色谱图见图1。 　　2.2.2 标准品溶液制备 取没食子酸标准品10 mg，精密称定后，加甲醇制成质量浓度为100.6 μg/mL的溶液，即得。 　　2.2.3 供试品溶液制备 精密量取各大黄水煎液5.0 mL，置50 mL容量瓶中，加30 mL甲醇，超声约40 min后，放冷至室温，再加甲醇定容至刻度，摇匀，过滤后取续滤液用微孔滤膜（0.22μm）滤过，即得。 　　2.2.4 标准曲线制备 精密吸取标准品溶液2.5、5、10、15、20、25 μL，按上述色谱条件进样测定，以峰面积A为纵坐标，进样量ρ为横坐标，绘制标准曲线，线性方程为：A=1796.45ρ+877.6，没食子酸在0.25～2.5μg范围内质量浓度与峰面积呈现良好的线性关系。 　　2.2.5 稳定性 精密吸取同一供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24、36 h各进样10 μL测定，结果峰面积RSD为1.04%，表明供试品溶液在36 h稳定性良好。 　　2.2.6 精密度 精密吸取标准品溶液10 μL，在同一天内连续进样测定6次，峰面积RSD为0.87%；精密吸取标准品溶液10 μL，每天测定1次，连续6 d，峰面积RSD为1.76%。日内及日间精密度均小于3%，符合测定要求。 　　2.2.7 重复性 取同一批的生大黄药材，共5份，按照“2.1”及“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液，测定没食子酸含量，RSD为1.13%，表明该方法重复性良好。 　　2.2.8 加样回收 取已知含量的生大黄药材5份，精密称定后，各加入标准品溶液1.0 mL，按