传统中药分析中常用色谱分析及衍生化的方法综述.docVIP

传统中药分析中常用色谱分析及衍生化的方法综述 　　摘 要：传统中药中所包含的天然生物活性化合物成分十分复杂，国内外制药公司正在将中药作为天然活性化合物资源库，同时中药的质量稳定性和可控性也在中药现代化的进程中变得越来越重要。要开发利用这些化合物，同时建立中药的质量标识，不同色谱分析方法的应用显得越来越重要。该文综述了近几年来常用的生物活性成分色谱分析和衍生化方法，为更好地了解这些成分结构和活性提供研究基础。 　　关键词：中药；生物活性成分；色谱；衍生化 　　中图分类号 R285 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）15-23-03 　　在中药的开发过程中，其关键问题是质量的稳定性和可控性。一般中药的识别是通过其形态学、TLC鉴别或者含量测定的几个标志物，然而这种方法由于不能提供药品的全部性质，所以不能区分具有相似形态或者相似化学组成的中药。如绿原酸不能用来区分金银花和菊花的花朵，用齐墩果酸无法识别女贞子、牛膝或威灵仙的根。中药的多靶点和协同作用的特性来自于它们具有多种成分，因此，在天然药物中找到一种用来反映大多数成分变化的综合方法是有必要的，尤其是药理作用和临床疗效的相关变化。近几年来，中药分析已经开始着重于其整体性和综合性，许多综合方法（比如指纹图谱―包括色谱法和光谱法、多组分分析）已经被用于中药质量控制，一些基于研究药物的吸收、分布、代谢和消除性能的生物色谱法也已经被用于中药分析和生物活性标志物的筛选，并且人们引入一些其他系统生物学（包括基因组学和蛋白质组学）来更清晰更科学地研究中药。本文主要综述了色谱分析及衍生化方法在中药定性及定量分析方面的研究应用。 　　1 薄层色谱法（TLC） 　　TLC对于中草药分析鉴别是一个简单、低成本、多用途的常用方法。该方法提供更多的信息和参数对中药进行全面识别和评价。与常规TLC有显著不同的微乳液薄层色谱（ME-TLC），其可以提供更高的检测灵敏度和更好的分辨率及重现性[1]。 　　2 GC及其联3用技术 　　由于GC和GC-MS的灵敏度、稳定性和高效率，该方法通常用于中药中挥发油成分的分析。全二维气相色谱（GC×GC）[2-3]是一种新颖的技术，该技术迅速对复杂混合物的分析具有明显优势，被认为是气相色谱法中最强大和最灵活的分离工具。这项技术是通过一个调制器将2根色谱柱与不同的分离机制结合在一起，因此它具有更高的灵敏度，更好的分辨率和容量，便于未知的化合物鉴定的组分离。利用该技术，在羌活中一共有769个化合物被初步鉴定和量化，对不同产地的这种植物分化提供了有用的信息。该方法常被人们用来发现一些微量化合物或者污染物，建立全面的指纹图谱和探索中药或其他药物中未知的挥发性化合物等。 　　3 HPLC及其联用技术 　　在中药众多的分析方法中，HPLC仍然是最流行的方法，这是由于它易操作、适用性广，同时对中药定性和定量准确度高。有学者研制出了一个HPLCESI/TOF-MS 方法，该方法能够同时地分析和量化山茶花中32种活性化合物，具有高选择性、高灵敏度和高精确度的特点[4]。然而，很难获得这么多对照品，所以大多数这样多组分定量方法仍被保留在实验室研究中。此外，在不同的仪器、不同的实验室相对校正因子的潜在波动应进一步验证。 　　HPLC的一个主要优点是可以和许多检测器联用，比如UV、DAD、ELSD、FLD、RID、MS和NMR等，HPLC可以提供更多的可能性用来探测不同的组成类型[5-11]。最近几年，人们已经将电量检测电极阵列（HPLC-CEAD）和电雾式检测器（CAD）引入中药分析[12-13]。CAD[7]是一个定量检测器，该检测器是进行三七皂苷分析时第一次将其运于中药分析，它和ELSD有着相似的性能，比如适合于UV无吸收或吸收弱的化合物，但是CAD有着更高的灵敏度，更宽的测试范围和更好的重现性。除了HPLC获得更合理的检测器，毛细管高效液相色谱和超高效液相色谱（UPLC）的出现提高了分析效能，所以取得了分析时间更短、分离效果更好的结果[14]。到目前为止，已经报道将UPLC运于中药分析的例子越来越多[15]。HPLC研究的另一个有前途的发展是引入全二维LC法（2D HPLC），该法比一维LC法更高的能力、分辨率和分离效率[16]。Ma结合排阻色谱和反相液相色谱柱去分析复杂的药方，清开灵注射液。和传统的一维色谱法相比，2D LC具有较高的峰值容量和自动化程度高[17]。 　　在实际应用中，人们发现有些因素影响二维色谱的发展，比如：（1）在二维色谱中非正交和小峰容量；（2）不亲和性，包括二维中流动相的不混溶性和流动相与MS检测器之间的不亲和性；（3）2个维度不匹配的分离速度，尤其是慢的速度在第二维中。因此，为了解决这些问题，人们已经做了一些改进。比