【大学课件】生物酶一知识分享.ppt

当底物浓度较低时： 反应速率与底物浓度成正比；反应为一级反应。 [S] V Vmax /sundae_meng 随着底物浓度的增高： 反应速率不再成正比例加速；反应为混合级反应。 [S] V Vmax /sundae_meng 当底物浓度高达一定程度： 反应速率不再增加，达最大速率；反应为零级反应 [S] V Vmax /sundae_meng 中间产物 解释酶促反应中底物浓度和反应速率关系的最合理学说是中间产物学说： E + S k1 k2 k3 ES E + P （一）米－曼氏方程式揭示单底物反应的动力学特性 /sundae_meng 1913年Michaelis和Menten提出反应速率与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程式 (Michaelis equation)。 [S]：底物浓度 V：不同[S]时的反应速率 Vmax：最大反应速率(maximum velocity) Ｋm：米氏常数(Michaelis constant) Ｖ Vmax[S] Km + [S] ＝ ── /sundae_meng E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速率取决于慢反应即 V = k3[ES]。 (1) S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S] =[St]。 米－曼氏方程式推导基于两个假设： /sundae_meng 米－曼氏方程式推导过程： ES的生成速率 = ES的分解速率 k2+k3 = Km （米氏常数） k1 令： 则(2)变为: ([Et]－[ES]) [S] = Km [ES] (2) = ([Et]－[ES])[S] k2+k3 [ES] k1 整理得： k1 ([Et]－[ES]) [S] = k2 [ES] + k3 [ES] 当反应处于稳态时： /sundae_meng 当底物浓度很高，将酶的活性中心全部饱和时，即[Et] =[ES]，反应达最大速率 Vmax = k3[ES] = k3[Et] (5) [ES] = ─── [Et][S] Km + [S] (3) 整理得: 将(5)代入(4)得米氏方程式： Vmax [S] Km + [S] V = ──── 将(3)代入(1) 得 k3[Et][S] Km + [S] (4) V = ──── /sundae_meng （二）Km与Vm是有意义的酶促反应动力学参数 Km值的推导 Km与Vmax的意义 /sundae_meng 当反应速率为最大反应速率一半时： Km值的推导 Km = [S] Km值等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度，单位是mol/L。 2 = Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 /sundae_meng Km与Vmax的意义 定义：Km等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度。 意义： Km是酶的特征性常数之一，只与酶的结构、底物和反应环境（如，温度、pH、离子强度）有关，与酶的浓度无关。 Km可近似表示酶对底物的亲和力； 同一酶对于不同底物有不同的Km值。 Km值 /sundae_meng Vmax 意义：Vmax=k3 [E] 定义：Vm是酶完全被底物饱和时的反应速率，与酶浓度成正比。 如果酶的总浓度已知，可从Vmax计算酶的转换数(turnover number)，即动力学常数k3。 /sundae_meng 定义: 当酶被底物充分饱和时，单位时间内每个酶分子催化底物转变为产物的分子数。 意义: 可用来比较每单位酶的催化能力。 酶的转换数 (turnover number) /sundae_meng 1. 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 Vmax[S] Km+[S] V = （林－贝氏方程） + 1/V= Km Vmax 1/Vmax 1/[S] 两边同取倒数 （三）Ｋm值与Ｖmax值可以通过作图法求取 -1/Km 1/Vmax 1/[S] 1/V /sundae_meng 2. Hanes作图法 在林－贝氏方程基础上，两边同乘[S] [S]/V=Km/Vmax + [S]/Vmax [S] [S]/V -Km Km/Vm 1/Vmax /sundae_meng 二、底物足够时酶浓度对反应速率的影响呈直线关系 在酶促反应系统中，当底物浓度大大超过酶的浓度，酶被底物饱和时，反应速率达最大速率