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响应面法优化蓝莓花青素提取工艺的研究 　　摘要：为优化蓝莓（Vaccinium Spp）提取工艺，试验选用水浴回流提取方法，研究了乙醇体积分数、提取温度、提取时间和液料比等因素对蓝莓花青素提取的影响，并用Box-Behnken法进行了响应面优化。结果表明，蓝莓花青素水浴回流提取的最优工艺参数为乙醇体积分数59%、提取温度62 ℃、提取时间62 min、液料比8∶1，在此优化条件下蓝莓花青素的提取量为8.444 7 mg/g，与理论值8.453 1 mg/g相差不大。 　　关键词：蓝莓（Vaccinium Spp）；花青素；提取；水浴回流；响应曲面法 　　中图分类号：S663.9；R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）10-2473-04 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.10.045 　　蓝莓（Vaccinium Spp）又名越橘，其富含花青素而且种类丰富[1]。花青素（Anthocyanidin）又称花色素，是一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，属黄酮类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷[2]。蓝莓果实中的花色苷具有改善视力、延缓衰老、抗疲劳、抗癌和消炎作用[3]。据国内报道[4-6]，花青素具有抗氧化、清除自由基、抗突变活性、减轻肝功能障碍、降血糖以及抗肿瘤的功能。蓝莓色素具有纯天然效应和营养功能，应用于食品中安全性高，对人体无害，具有广阔的市场应用前景[7]。 　　响应面法是以多元二次回归数学模型为工具，能有效地找到因素间的最优组合，相比于传统的全因子试验设计，该法能在更为经济的试验次数下得到精确的统计结果，具有周期短、精确度高等优点[8]。本试验采用响应面法，以蓝莓花青素提取量为考察指标，对影响蓝莓花青素提取量的一些关键因素进行研究，探求水浴回流法提取蓝莓花青素的最佳工艺条件，以便于对蓝莓资源进一步开发利用。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料和试剂 　　蓝莓，购于沈阳家乐福超市；原花青素标准品（UV≥98%），购于上海江莱生物科技有限公司；香草醛、无水甲醇、浓盐酸、无水乙醇、丙酮均为国产分析纯。 　　1.2 仪器 　　RRHP-200型高速万能粉碎机，欧凯莱芙（香港）有限公司；DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司；DF-101S型集热式恒温加热磁力搅拌器、SHZ-D（Ⅲ）型循环水式真空泵，巩义市予华仪器有限责任公司；UV2800型紫外可见光分光光度仪，北京普析通用有限公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 花青素含量测定 试验采用盐酸-香草醛法[9，10]。精确称取100 mg原花青素标准品，用去离子水溶解并定容至100 mL，用移液管移取原花青素溶液1.5、3.0、4.5、6.0、7.5 mL，分别用去离子水定容至10.00 mL。再精密称量香草醛4.000 g，用甲醇溶解并定容至100.00 mL。取原花青素溶液1.00 mL，依次加入香草醛-甲醇溶液6.00 mL、浓盐酸3.00 mL。以甲醇溶液为空白对照，在500 nm 处测吸光度。 　　1.3.2 样品测定 准确称取蓝莓3 g，按一定的液料比（mL∶g，下同）加入到一定体积分数的乙醇，在一定温度下水浴回流提取一定的时间，真空抽滤后，滤液用真空旋转蒸发器浓缩至少于50 mL，转入50 mL容量瓶中并用相同体积分数的乙醇溶液定容至刻度，得到待测液。 　　1.3.3 单因素试验 分别考察提取溶剂、乙醇体积分数、提取时间、提取温度、液料比对花青素提取量的影响。 　　1.3.4 响应曲面法试验设计 根据单因素试验结果，以乙醇体积分数（A）、液料比（B）、提取温度（C）、提取时间（D）4个因素为自变量，以蓝莓花青素提取量为响应值，利用Box-Behnken组合设计试验方案，进行水浴回流提取蓝莓花青素条件的优化，因素与水平见表1。 　　2 结果与分析 　　2.1 标准曲线 　　根据所取标准品质量浓度和吸光度数据绘制原花青素标准曲线见图1。经数据处理分析获得原花青素标准曲线回归方程为：y=12.451x+0.002，r2=0.999。 　　2.2 提取溶剂对花青素提取量的影响 　　以70%甲醇、70%乙醇及70%丙酮为提取溶剂对花青素提取量的影响见图2。由图2可知，溶剂为70%乙醇的花青素提取量比溶剂为70%甲醇和70%丙酮的提取量略高。实际生产中，用乙醇代替了许多常用的溶剂如甲醇、丙酮、乙醚，因为这些试剂有毒性，不利于粗提取物在食品和药品中的进一步利用[11]，因此试验选择用乙醇作为提取溶剂。 　　2.3 单因素试验结果 　　2.3.1 乙醇体积分数对花青素提取量的影响 不同乙醇体积分数对花青素提取量的影响