响应面法优化亚临界水提取银耳多糖工艺的研究.docVIP

响应面法优化亚临界水提取银耳多糖工艺的研究 　　摘要：采用亚临界水提取技术提取银耳多糖，考察提取温度、提取时间、液料比对多糖提取得率的影响，结合响应面法优化其提取工艺，并与传统热水浸提法进行比较。结果表明，亚临界水提取银耳多糖的最佳工艺条件为提取温度138 ℃、提取时间30 min、液料比30 mL/g，在该条件下银耳多糖提取得率可达34.58%。与传统热水浸提法相比，银耳多糖的提取得率提高了84.23%，亚临界水提取法可明显缩短银耳多糖的提取时间和提高银耳多糖的提取得率。 　　关键词：银耳；多糖；亚临界水提取；响应面法优化 　　中图分类号： TS201.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）07-0339-04 　　银耳是一种经济价值高、营养丰富的药食两用菌，具有润肺生津、滋阴养胃、补脑强心等功效。我国是银耳生产大国，但目前市场上销售的银耳品种单一，绝大部分是未经任何加工的银耳干品，在一定程度上限制了银耳的消费。银耳多糖是银耳的主要活性成分，具有提高机体免疫能力、降血糖、降血脂、抗衰老、抗溃疡、抗血栓形成、抗突变等作用，可广泛应用于功能性食品、医药保健品及日用化妆品等领域[1-4]。银耳多糖的常用提取方法是热水浸提法，但这种传统的提取方法存在耗时长、提取率低、易造成资源浪费等问题。银耳多糖分为胞外多糖和胞壁多糖，其中胞壁多糖存在于细胞壁内部，用热水浸提很难提取完全，即使是采用稀酸提取法或稀碱提取法，又由于部分多糖易发生水解，破坏多糖的活性结构，导致多糖损失和提取率降低。亚临界水提取技术是近年来发展起来的一种新兴的提取技术，具有提取时间短、提取效率高、环境友好等技术优势，是一种很有开发潜力的绿色提取技术[5-7]。本研究采用亚临界水提取银耳多糖，研究提取温度、提取时间、液料比对银耳多糖提取得率的影响，并结合响应面分析法优化银耳多糖的亚临界水提取工艺，提高银耳多糖的提取得率，旨在为银耳多糖的开发和利用提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　市购干燥的银耳子实体，经万能粉碎机粉碎后，得到过40目筛的银耳粉末，备用。葡萄糖标准品；苯酚、浓硫酸均为分析纯；去离子水；UV-2102 PC型紫外-可见分光光度计；TGL-16C型高速台式离心机。自制亚临界水萃取装置，如图1所示。 　　1.2 方法 　　1.2.1 亚临界水提取 称取一定量的银耳粉末置于萃取罐的物料篮内，在不同提取温度、提取时间、液料比的条件下进行提取，亚临界水提液4 000 r/min离心10 min，测量上清液体积，测定银耳多糖含量，计算银耳多糖得率。 　　1.2.2 热水回流提取 称取一定量的银耳粉末置于圆底烧瓶内，按液料比60 mL/g加入去离子水，在100 ℃水浴锅回流提取6 h，提取液在4 000 r/min离心10 min，取上清液，测定银耳多糖含量，计算银耳多糖得率。 　　1.2.3 多糖标准曲线制作 0.1 mg/mL葡萄糖标准溶液：将葡萄糖干燥至恒质量后准确称取1.000 g，用去离子水溶解并定容至1 L，梯度稀释至0.1 mg/mL。分别取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL葡萄糖标准溶液于20 mL比色管中，用去离子水补至2.0 mL；混合均匀后分别依次加入5%苯酚1.0 mL、浓硫酸5.0 mL，摇匀；静置10 min放入沸水浴中反应15 min，水浴冷却至室温，490 nm处进行测量，以吸光度为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。 　　1.2.4 多糖测定和计算方法 参考苯酚-硫酸法[8]测定多糖含量：准确吸取样品液1.0 mL，加水补充至2.0 mL，摇匀，加入5%苯酚1.0 mL，摇匀，再加5.0 mL浓硫酸，迅速摇匀。室温放置5 min，在沸水浴中保温15 min，用自来水冷却 5 min，再摇匀，于波长490 nm处测定吸光度。多糖得率计算公式如下： 　　粗多塘得率=C×V1×N×10-3V2×m×100% 　　式中：C表示经过稀释后测定的多糖含量（μg）；V1表示提取后得到的上清体积（mL）；N表示稀释倍数；V2表示用于测定的上清体积（mL）；m表示用于提取的银耳质量（mg）。 　　1.2.5 响应优化法试验设计 在提取温度、提取时间、液料比3个单因素试验基础上，根据Box-Behnken中心组合试验设计原理，采用三因素三水平响应面分析法，依据回归分析确定各工艺条件的影响因子，以多糖提取得率为响应值作响应面与等值线图，分析优化最佳提取条件。 　　2 结果与分析 　　2.1 单因素试验 　　根据文献报道，在亚临界水提取过程中，压力只是用来使水保持液体状态[9]，所以本试验不考虑压力对多糖得率的影响，选择3 MPa作为提取压力