响应面法优化怀山药中超临界提取薯蓣皂素工艺的研究.docVIP

响应面法优化怀山药中超临界提取薯蓣皂素工艺的研究 　　[摘要] 目的 探讨影响超临界CO2提取怀山药中薯蓣皂素收率的重要因素，旨在为怀山药的综合利用提供科学依据。方法 利用超临界CO2提取怀山药中薯蓣皂素。在单因素试验的基础上，采用响应面法研究超临界CO2提取的最佳工艺条件，并进行Box-Benhnken Design的中心组合试验设计，RSA法分析对试验数据进行，对拟合数学模型进行描述，筛选出超临界CO2提取怀山药中薯蓣皂素的最佳工艺条件。 结果 以无水乙醇为提取溶剂，超临界CO2萃取怀山药中薯蓣皂素的最佳工艺条件：萃取温度45℃，萃取压力40 MPa，CO2流量为10 kg/h，在此最佳工艺条件下薯蓣皂素收率为3.49%。 结论 超临界CO2提取怀山药中薯蓣皂素的工艺参数采用进行RSA法优化，并建立回归模型方程，该模型回归极显著，且失拟项不显著。 　　[关键词] 怀山药；薯蓣皂素；超临界CO2萃取；响应面法 　　[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）10（a）-0108-05 　　薯蓣皂素，又称为薯蓣皂苷元（Diosgenin），是合成甾体激素药物的基础原料和起始中间体，分子结构式见图1。资料显示[1-4]薯蓣皂素有祛痰、脱敏、抗炎、降脂、抗肿瘤等作用，在心脑血管、癌症、呼吸道等疾病的治疗方面被广泛应用，具有较高的药用价值，已引起广大学者的广泛关注。从怀山药中提取薯蓣皂素对开发该药物资源具有一定的指导作用。近年来发展较快的新型提取方法是超临界CO2，具有强选择性、能耗低、高效性、提取时间短、节约溶剂等特点，在生物活性及天然化合物成分等的提取中被广泛应用到。 　　本研究采用响应面分析法（response surface analysis，RSA），并进行Box-Benhnken Design的中心组合试验设计，RSA法分析对试验数据进行，对拟合数学模型进行描述，对影响超临界CO2提取怀山药中薯蓣皂素收率的重要因素进行了系统研究，筛选出超临界CO2提取怀山药中薯蓣皂素的最佳工艺条件，旨在为怀山药的综合利用提供科学依据[4]。 　　1 材料与方法 　　1.1 原料及试剂 　　怀山药（市售）、CO2（食品级，纯度99.9%）、薯蓣皂素标准品（定量分析用，中国药品生物制品检定所提供）、95%乙醇，分析纯，郑州光明化工有限公司；UV-2102Pc型紫外分光光度计（北京谱西通用仪器有限公司）；Agilent100高效液相色谱系统；电子天平（上海申生科技有限公司）；超临界CO2萃取设备（杭州华黎泵业有限公司）；HR1727粉碎机（珠海飞利浦有限公司）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 薯蓣皂素标准曲线的制作及回归方程 薯蓣皂素的标准曲线的制作按照参考文献[5-7]中的方法进行，回归得到薯蓣皂素浓度与吸光度的线性方程：A = 1.623C + 0.0067，相关系数为r = 0.995。 　　1.2.2 怀山药中薯蓣皂素含量的测定 怀山药洗净晾干后切碎，粉碎机粉碎过20目筛备用。准确称取怀山药样品150 g，置于1 L萃取釜中，将超临界CO2和95%乙醇夹带剂按一定量混合泵入萃取釜中，按一定温度和压力萃取一定时间后，调节分离釜开关，在分离釜出口处用接收瓶接收产物。取待测液25 mL，置于250 mL容量瓶中，摇匀后放置15～20 min，于410 nm处测定其吸光度A。 　　1.2.3 薯蓣皂素收率的计算 由吸光度A计算怀山药样品提取液中薯蓣皂素的浓度C，按下式计算怀山药中薯蓣皂素的收率： 　　1.2.4 响应面法优化试验 以单因素试验为基础，考察变量为萃取压力、萃取温度、CO2流量等因素，响应值为薯蓣皂素收率，采用Design-Expert 7.1软件，对超临界CO2提取怀山药中薯蓣皂素的工艺条件进行优化。 　　2 结果与讨论 　　2.1 实验因素的考察 　　在夹带剂（95%乙醇）用量一定（300 mL）情况下，选取萃取温度、萃取压力和CO2流量等因素进行实验。 　　2.1.1 温度对薯蓣皂素收率的影响 萃取压力越高对萃取物的提取越有利，但操作过程的不安全性提高；萃取物料的速度大小可对萃取效果产生很大的影响，CO2流量提高有利于传质，但过高的流量将会使物质的交换不彻底，并在参考文献[4-6]基础上，初步选择萃取压力为30 MPa，CO2流量10 kg/h，以此为基础考察温度对薯蓣皂素收率的影响。由图2提示，保持恒定压力条件下，随着温度的升高，薯蓣皂素收率呈现出先增加然后降低的现象，说明温度对薯蓣皂素收率有很大影响，可能原因是，温度从35℃上升至45℃的过程中，因温度升高而引起的薯蓣皂素在超临界CO2中溶解能力增大，薯蓣皂素收率呈上升趋势；当温度从