chapter 7 糖组学精编.pptVIP

C、核磁共振技术（NMR） 目前,NMR 技术已成为糖链立体化学结构分析最重要的方法之一,可确定糖链的构型、连接位置、分支和微观多样性。 Shaw 等利用二维1H NMR技术对维持花生过氧化物酶稳定的3 个糖链进行了结构分析。 Kogelberg 等利用ESI－MS 和1H NMR技术发现了人乳中新的糖链结构。 但NMR 测定糖的讯号峰重叠严重,解析较难,灵敏度不高,而且多维NMR 需要毫克级样品,这对多数糖复合物中的微量糖链是很难达到的。 2）功能糖组学研究技术 随着糖组学研究的深入，基于芯片的原理人们发明了用于糖组研究的各类糖芯片。自Wang 等首次报道用糖芯片进行研究以来，这种方法得到了广泛的应用。由于其具有信息量大、可进行自动化操作等特点，就如基因芯片对于基因研究和蛋白质芯片对于蛋白质组研究一样，糖芯片在糖组学的研究中同样也将扮演重要的角色。 （1）研究凝集素-糖相互作用的芯片 根据凝集素和寡糖之间的特异性相互作用，将寡糖或糖基复合物固定于芯片上，再用荧光素标记的凝集素进行杂交，检测阳性信号分析与已知凝集素相互作用的寡糖结构。这种方法的最大优点是可以同时检测多个样本，具有批量化、标准化和自动化的特点。 Nimrichter等采用含有200个点的糖芯片研究鸡肝细胞对糖的吸附情况。研究表明表面含有C 型凝集素的鸡肝细胞可以特异结合到以各种链接方式固定的N- 乙酰葡萄糖胺残基的非还原性末端，而不能与半乳糖或N- 乙酰半乳糖胺的非还原性末端结合。 （2）杂交糖类/糖蛋白芯片 Ratner等开发出一种杂交糖类/糖蛋白芯片，可以快速测定在结合过程中，蛋白质- 蛋白质相互作用和糖类- 蛋白质相互作用的主反应一方。通过将糖蛋白和它表面的寡糖都点到点阵上，就可以迅速证实结合的决定簇。 将GAPS II 型玻片用两种化学物质进行表面修饰，在一侧用马来酰亚胺修饰，另一侧用N-羟基丁二酰亚胺(N-hydroxysuccinimide,NHS)活化的酯进行修饰。然后分别将糖和糖蛋白点在同一张芯片的马来酰亚胺侧和N H S 活化的酯一侧，用一种糖结合蛋白杂交来确定蛋白肽是否是结合时所必需的成分。 Adams 等应用这种技术证实了在HIV表面的糖蛋白gp120与人类蛋白相互作用过程中，gp120 的糖链起到了至关重要的作用。 （3）用于研究蛋白质-糖相互作用的表面质子共振技术 为了监测凝集素和固定化糖在玻片表面的相互作用，糖生物学家于上世纪90年代将表面质子共振(surface plasmon resonance, SPR)光谱应用于分析。 该技术是利用了物理光学的原理，在研究两分子相互作用时，将一种分子固定在传感片表面，而含有另一种分子的溶液流过其表面，两种分子的结合会使传感片表面的折射率改变，因此检测两分子间的相互作用。这种技术不仅可以时时监测两种分子的结合情况，还可以测量结合亲和力的强弱。 Smith等将SPR 技术用于分析刀豆凝集素Con A 与甘露糖和木菠萝凝集素jacalin与半乳糖的相互作用。 SPR 在糖芯片中的应用为糖组学研究提供了一种有力的研究工具。人们可以用它快速测定糖与凝集素或蛋白质之间的特异性作用，还可以对它们之间相互作用的增强剂或抑制剂进行高通量筛选分析。 3）生物信息学 糖蛋白糖链研究的信息处理、归纳分析以及糖链结构检索都要借助生物信息学来进行。目前这方面的数据库和网络信息很多,其中CFG、KEGG和CCSD 等就是糖蛋白糖链结构研究的很好资源。 比如利用CFG可以查找糖链亚结构、分子量和组成等许多参数;而CCSD 收集的众多糖链结构数据为糖谱的构建和糖链结构查新提供了很好的保障。 目前,借助生物信息学构建的标准糖谱已成为样品糖链结构鉴定的主要工具,但其强大功能的发挥还有赖于相关应用软件、数据库资源和计算机网络的发展和完善。 可以说,生物信息学是糖组学糖蛋白糖链结构分析技术平台不可缺少的一项,是国际合作和资源共享的结果,为糖链结构的测定和新糖链结构的发现提供了强大的技术支持。 4、糖组学的应用 ——在肿瘤研究中的应用 糖基化改变普遍存在于肿瘤的发生、发展过程中,分析糖基化修饰对于深入研究肿瘤的机制及诊断治疗至关重要,通过糖组学的方法分析肿瘤细胞与正常细胞之间所表现出来的糖蛋白的差异,作为诊断和控制疾病的工作焦点。 糖组学并不是以单个糖蛋白作为靶点,而是在任何可以改变生物体系的所有可能网络路径中发掘其影响,所以糖组学要求对多种种属群体成员进行筛选,以揭示那些发生在蛋白表达中与个体水平相类似的群体水平上的变化。 目前,双相凝胶电泳已经成功地用于鉴定糖蛋白差异,已报道众多的血清糖蛋白作为肾细胞癌的标记物; HPA 相关糖蛋白作为乳腺癌、结直