二氧化碳抗溶剂法制备肺部给药用PLLA多孔微球及其生物学评价-生物化工专业论文.docx

摘要 本文选用碳酸氢铵（AB）作为致孔剂，采用压缩二氧化碳抗溶剂法（PCA） 分别制备了肺部给药用聚乳酸多孔微球（PLLA PMs）和载胰岛素的聚乳酸多孔 微球（INS-PLLA PMs），并对其生物相容性和医用功能性进行了研究。论文主 要工作概括如下： 1．PLLA PMs 的制备与表征：结合 AB 致孔法和 PCA 工艺制备的微球表面粗糙 呈多孔结构，几何粒径（Dg）约 20 μm，空气动力学直径（Da）约 4.2 μm， 具有良好的流动性和雾化性能，肺内沉积结果显示 PLLA PMs 可有效沉积到 SD 大鼠的支气管底部及肺上叶；分析傅立叶变换红外光谱（FTIR）、X-射 线粉末衍射（XRPD）和差示扫描量热（DSC）结果表明，经二氧化碳抗溶 剂法处理后的 PLLA 化学结构未发生改变，热稳定性有所降低，仍保持了一 定的晶型结构；且在体外模拟肺液降解试验中展现出高于 PLLA 实心微球降 解速度的优势。 2．INS-PLLA PMs 的制备与表征：制备得到的微球表面粗糙、呈多孔结构，Dg 为 15.62 μm，Da 为 4.26 μm，FPF 为 64.58%，经喷雾器雾化时间持续 0.12 s， 雾化效率约为 90.95%，展现出良好的空气动力学性质。FTIR 结果表明，经 二氧化碳抗溶剂法处理的 INS-PLLA PMs 化学成分未发生变化。圆二色谱 （CD）分析及生物活性验证结果表明胰岛素经超临界流体技术处理后，其二 级结构未发生显著变化，仍保持了良好的降血糖活性。胰岛素均匀分散于载 体基质中，药物体外释放可持续 24 h，具有药物缓释效果。 3．生物相容性研究：肺部毒性考察了肺部给药 PLLA PMs 后的急性肺损伤和免 疫炎症毒性，结果显示空气和微球的运动会引起一定程度的急性肺损伤，使 乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（ALP）及其他蛋白物质少量泄漏，趋化 炎性细胞因子白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）及肿瘤坏死因子 -α（TNF-α），造成轻度的免疫炎症反应，但仍属于机体正常的免疫防御； 整体毒性考察了 PLLA PMs 对 A549 细胞的影响，其细胞增殖率约 90%，毒 性反应级别为 1，具有良好的细胞生物相容性；其体外溶血率低于 5%，血液 相容性良好；KM 小鼠腹腔注射 PLLA PMs 混悬液后无急性全身毒性作用。 4．医用功能性研究：INS-PLLA PMs 经肺部给药后可有效沉积到大鼠气管、右 肺上叶及左全肺，0.5 h 内随着肺部呼吸运动进而分散于全肺，4 h 内部分胰 岛素已通过肺内吸收进入血液循环，8 h 内吸收清除完全；II 型糖尿病大鼠降 血糖试验 结果表明 ， 空白 PLLA PMs 经 肺部给药 后无降血 糖 作用，而 INS-PLLA PMs 经肺吸入后血糖值在 2 h 后达到最低，并维持在正常血糖值 水平至 4 h，随后血糖升至较高水平，呈现先降低再升高趋势，具有显著降 血糖活性，与皮下注射胰岛素效果相当。 综合分析实验结果可知，二氧化碳抗溶剂法制备的 INS-PLLA PMs 展现出 好的生物相容性和医用功能性，有潜力应用于肺部给药治疗糖尿病的药物新剂 型开发。 关键词：肺部给药 二氧化碳抗溶剂法 聚乳酸多孔微球 生物相容性 II 型糖尿病 Abstract In this thesis, poly-L-lactide porous microspheres (PLLA PMs) and insulin-loaded PLLA PMs (INS-PLLA PMs) for pulmonary drug delivery were successfully developed in an emulsion-combined precipitation of compressed CO2 antisolvent (PCA) process using ammonium bicarbonate (AB) as a porogen. The biocompatibility evaluation and functional evaluation of microspheres were carried out. The main work can be summarized as follows: The preparation and characterization of PLLA PMs: the resulting PLLA PMs exhibited a rough and porous shape, with a geometric mean diameter (Dg) of 20 μm, an aerodynamic diameter (