二甲基甲酰胺对心肌细胞L-型钙电流影响的实验研究-劳动卫生与环境卫生学专业论文.docxVIP

英 文 缩 略 词 表 Abbreviation 英文缩写 英文全称 中文全称 AMCC N - Methyl Carbamyl Cysteine N-甲基氨基甲酰半胱酸 4-AP 4-Aminopyridine 4-氨基吡啶 CKMB Creatine Kinase Isoenzyme 肌酸激酶同工酶 CCK8 Cell Counting Kit-8 CCK-8 试剂盒 DMF N,N-Dimethylformamide 二甲基甲酰胺 DMEM Dulbecco minimum essential medium 达尔伯克必需基本培养基 DMSO Dimethylsulfoxide 二甲基亚砜 FBS Fetal Bovine Serum 胎牛血清 Fig igure 图 HEPES 4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazineethanesul 4-羟乙基哌嗪乙磺酸 fonic acid HMMF N - Methyl - Methanol Formamide N-甲基-甲醇酰胺 IC50 Inhibitory Concentration 50% 半数抑制浓度 LVDCC L-type Voltagpte Dependent Ca2+ 电压依赖Ｌ-型钙离 Channel 通道 MIC Methylisoeyanate 甲基异氰酸酯 NMF N - Methyl Formamide 甲基甲酰胺 PBS Phosphatic buffer solution 磷酸盐缓冲盐溶液 P probability 概率 Tab table 统计表 TEA-Cl Tetraethylammonium Chloride 氯化四乙胺 VDCs Voltage Dependent Channels 电压依赖性通道 二甲基甲酰胺对心肌细胞 L-型钙电流影响的实验研究 中文摘要 目的 二甲基甲酰胺（DMF）是一种应用极其广泛的万能有机溶剂，在各个制造 行业大量使用，其对职业接触人群健康影响也越来越大。目前研究较为深入的是 DMF对肝脏的损伤而其对心脏损害的研究十分罕见，仅见于少量临床病例报告 中。课题组在前期的现场卫生学调查中发现DMF职业接触者有明显的心电图异常 和心律不齐表现，动物染毒实验中也发现DMF会致使心肌细胞发生病变坏死及产 生脂质过氧化等改变。为了研究DMF对心肌产生损害的机制，本实验采用了全细 胞膜片钳技术记录不同剂量的DMF作用后H9C2心肌细胞的L-型钙电流通路变 化，研究DMF对心肌细胞造成的电生理改变，初步探讨DMF对心肌的毒性作用机 制。 材料和方法 实验用心肌细胞系购于中科院上海细胞库，为正常大鼠心肌细胞系 （H9C2），实验室培养细胞处于对数生长期时，消化并置于玻片上（细胞密度约 为l105/ml），待2h后细胞完全贴壁加入含有10%胎牛血清的高糖DMEM培养液， 在5％CO2、37oC培养箱中培养24h。培养24h后用含有不同剂量DMF的新鲜培养液 再次培养心肌细胞24h，用PBS缓冲液清洗三次后置于细胞外液中用于膜片钳实 验。保持实验环境在25oC左右，镜下选择贴壁良好、边缘清晰、折光性良好的单 个细胞进行实验。微电极采用两步法拉制而成，充灌电极内液后阻值在2-5MΩ。 微电极经电极夹持器与注射器相连，给正压后浸入电极外液接触心肌细胞，使用 注射器给予负压形成高阻封接，继续施加负压吸破细胞膜，形成全细胞记录模 式。在电压钳模式下，记录低剂量组（140mM DMF染毒组）、高剂量组（220mM DMF染毒组）的L-型钙电流的变化，并与正常心肌细胞对照组进行比较。钙电流 的记录和刺激程序均由PatchMaster软件完成，输出信号经HEKA EPC10 USB放大 器放大。记录的信号经放大保存后，用配套的FitMaster分析软件进行处理，再经 相应分析模块得出相应的图形和数据。组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有 统计学意义，数据处理使用SPSS13.0统计软件完成。 结果 经过具体分析后发现三个实验组的I-V曲线均在+20mV左右达到峰值，心肌 细胞的L-型钙电流的I-V曲线的形状并没有明显改变，表明钙电流的电压依赖性没 有改变，但是随着DMF的作用剂量增大，I-V曲线不断上移，心肌细胞L-型钙电 流不断减小。峰值电流密度比较显示：对照组的平均峰值电流密度为-9.50±0.44 pA/pF （ n=10 ）， 低 剂 量 组 （ 140mM DMF） 的 平 均 峰 值 电 流 密 度 为 -4.43±0.46 pA/pF（n=10），峰值电流密度下降了53.37%，差异有统计学意义（P＜0.01）。高 剂量组（220mM DMF）的平均峰值电流密度为-2.37±0.23 pA/pF（