二甲基甲酰胺通过线粒体通路诱导H9c2心肌细胞凋亡的实验分析-劳动卫生与环境卫生专业论文.docxVIP

安徽医科大学硕士学位论文 安徽医科大学硕士学位论文 目录 缩略词表 1 摘 要 中文摘要 2 英文摘要 3 正 文 1 前言 6 2 材料与方法 9 3 结果 17 3.1 细胞及细胞核形态观察 17 3.2 线粒体凋亡通路相关蛋白检测 18 3.3 免疫荧光细胞化学对胞内 Cyt-c 定位 27 4 讨论 30 5 结论 34 参考文献 35 附 录 40 致 谢 41 综 述 1 摘要 42 2 综述正文 42 3 参考文献 48 英 文 缩 略 词 表 Abbreviation 英文缩写 英文全称 中文名称 ANOVA analysis of variance 方差分析 AP Ammonium Persulphate 过硫酸铵 含半胱氨酸的天冬氨酸 Caspase Cysteinyl aspartate specific proteinase 蛋白水解酶 Cyt-c Cytochrome C 细胞色素 C DAPI 4’, 6-diamidino-2-phenylindole 4’, 6-二脒基-2-苯基吲哚 DMEM Dulbecco minimum essential medium 达尔伯克必需基本培养基 DMF Dimethylformamide 二甲基甲酰胺 DMSO Dimethylsulfoxide 二甲基亚砜 ECL Enhanced chemiluminescence 增强化学发光 FBS Fetal Bovine Serum 胎牛血清 Fig Figure 图 IFC Immune-fluorescence cytochemistry 免疫荧光细胞化学 P probability 概率 PBS Phosphatic Buffer Solution 磷酸盐缓冲盐溶液 RIPA Radio immunoprecipitation assay 蛋白裂解液 sc Santa Truz 圣克鲁兹生物技术公司 SDS Sodium Dodecyl Sulfate 十二烷基磺酸钠 SPSS Statistical product and service solution 统计产品与服务解决方案 TEMED N,N,N,N-Tetramethylethylenediamine N,N,N,N-四甲基二乙胺 WB Western Blotting 蛋白免疫印迹 注：以上缩写按照首字母顺序排序 1 二甲基甲酰胺通过线粒体通路诱导 H9c2 心肌细胞 凋亡的实验研究 摘要 目的 探讨线粒体通路是否参与了二甲基甲酰胺（DMF）诱导 H9c2 心肌细 胞凋亡的过程，以及细胞氧化还原水平的改变与该与通路的激活是否有关。 方法 观察 DMF 对 H9c2 心肌细胞形态以及核形态的影响。用 western blotting（WB）检 测不同剂量 DMF（0 mM，50 mM，100 mM，200 mM）染毒 24h 后胞浆内全长 Caspase-3（Procaspase-3）、活化的 Caspase-3（Cleaved caspase-3）、全长 Caspase-9 （Procaspase-9）、Bax、 Bcl-2、细胞色素 C（Cyt-c）水平的改变；检测 200 mM DMF 染毒不同时间后（0h，2h，4h，8h，12h，24h）以及 4 mM N-乙酰半胱氨酸（NAC） 预作用 1h 继而 200 mM DMF 作用 24h 后胞浆内 Cleaved caspase-3，Bcl-2，Cyt-c 水平的变化。采用免疫荧光细胞化学法（IFC）对 200 mM DMF 染毒不同时间后（0h， 2h，4h，8h，12h，24h）以及 4 mM NAC 干预 1h 继而 200 mM DMF 染毒 24h 后 细胞内 Cyt-c 进行定位, 观察细胞内 Cyt-c 的变化动态。 结果 200 mM DMF 染毒 24h 后大部分细胞皱缩、部分细胞变圆并脱离培养瓶壁悬浮到培养基中；部分细胞 核染色质出现不同程度的浓缩现象。不同剂量 DMF（0 mM，50 mM，100 mM， 200 mM）染毒 24h 后胞浆 Procaspase-3 和 Bax 水平有升高，Procaspase-9 和 Bcl-2 水平降低，Cleaved caspase-3 和 Cyt-c 水平升高，组间差异有统计学意义 （Procaspase-3：F=16.11，P=0.0009；Bax：F=60.31，P＜0.0001；Procaspase-9： F=16.66，P=0.0008；Bcl-2：F=577.8，P＜0.0001；Cleaved caspase-3：F=23.33， P=0.0003；Cyt-c：F=104.0， P＜0.0