促性腺激素释放激素激动剂对体外培养子宫肌瘤肌细胞及内膜细胞凋亡的影响-妇产科学专业论文.docxVIP

促性腺激素释放激素激动剂对体外培养子宫肌瘤 肌细胞及内膜细胞凋亡的影响 广州医学院附属广州市第一人民医院 硕士研究生： 王冬昱 导 师： 康佳丽 教 授 中文摘要 目的： 1. 检测体外培养子宫肌瘤（uterine myoma）患者子宫肌瘤细胞及内膜细胞的 凋亡变化并研究促性腺激素释放激素激动剂（gonadotropin releasing hormone agonist, GnRHa）对上述两者凋亡的影响。 2. 探讨子宫肌瘤的发生与细胞凋亡的关系,子宫肌瘤内膜细胞的凋亡变化及 其意义，深入研究 GnRHa 治疗子宫肌瘤的作用机制，为发展更有效安全的临床治疗 提供新的思路及实验依据。 材料与方法： 1. 研究对象 2008 年 1 月至 2009 年 6 月在广州医学院附属广州市第一人民医院妇科住院行 子宫肌瘤切除术的有异常子宫出血症状的子宫肌瘤患者 36 例，月经干净后手术，术 后病理检查确诊，术中切除子宫肌瘤取其瘤核标本为研究组 A，同时取同一患者子 宫肌瘤周围正常平滑肌组织为对照组 A；同组患者术前分段诊刮取其宫腔内膜标本 为研究组 B，其病理结果均提示增殖期内膜，无合并子宫内膜病变，该组患者年龄 28～46 岁，平均（38.21±2.28）岁。 选取同期因卵巢上皮性良性肿瘤行卵巢囊肿剔除术的患者 22 例，严格除外合并 子宫肌瘤、子宫内膜异位症、炎症及恶性肿瘤等其他疾病可能，月经干净后手术， 术前患者知情同意情况下分段诊刮取其宫腔内膜标本为对照组 B（病理结果同样均 提示增殖期内膜），该组患者年龄 22～45 岁，平均（35.23±3.32）岁。 以上患者术前 3 个月内未服用过激素类药物，无其他内分泌、免疫和代谢疾病。 2. 实验方法 对研究组及对照组所取的细胞样本分别进行体外培养，免疫组化鉴定细胞类型， 确定为子宫平滑肌细胞及子宫内膜细胞后分别用 GnRHa 10－7 mol/L、10－5 mol/L 两 种药物浓度作用 24、48、72 h 三个时间点后联合采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的 缺口末端标记技术(TdT-mediated biotinylated dUTP nick end labeling,TUNEL) 及流式细胞仪 AnnexinV-FITC/PI 方法检测各组细胞的凋亡率。 3. 统计学分析 本研究结果采用 SPSS13.0 统计软件处理，组间比较用单因素方差分析，方差齐 者用 LSD-t 法，方差不齐者用 Dunnett-t 法。以 P0.05 为差异有统计学意义。 结果： 1、GnRHa 作用前，子宫肌瘤细胞（研究组 A）凋亡率在各时间点均低于正常子 宫平滑肌细胞（对照组 A），培养 24h 时差异无统计学意义（P0.05），培养 48h、72h 时差异有统计学意义（P0.01），而子宫肌瘤内膜细胞（研究组 B）凋亡率在各时间 点均低于正常子宫内膜细胞（对照组 B），差异均有统计学意义（P0.01），上述各 组细胞都随时间的推移凋亡率增加。 2、GnRHa 作用后，各组细胞的凋亡率不同程度高于作用前，且随作用时间、浓 度的增加而增加，具有时间和剂量依赖性，研究组 A 各时间点、药物浓度细胞凋亡 率均超过并高于同时间、药物浓度的对照组 A，培养 24h 时差异无统计学意义 （P0.05），培养 48h、72h 时差异有统计学意义（P0.01），研究组 B 各时间点、药 物浓度细胞凋亡率均超过并高于同时间、药物浓度的对照组 B，差异均有统计学意 义（P0.01）。 结论： 1. 体外培养子宫肌瘤细胞的凋亡率低于正常子宫平滑肌细胞，提示凋亡调控失 衡致凋亡率低可能参与了子宫肌瘤的发生和发展。 2. 有异常子宫出血症状的子宫肌瘤内膜细胞（无合并子宫内膜病变）的凋亡率 低于正常子宫内膜细胞，子宫肌瘤内膜细胞凋亡异常可能是子宫肌瘤的遗传学特性 所决定，但同时也可能受子宫肌瘤局部高雌、孕激素水平及各种生长因子的影响。 细胞凋亡及其调控在子宫内膜周期性脱落、出血和修复机制中起重要作用。本研究 结果推测子宫肌瘤内膜细胞凋亡异常可能导致子宫内膜过度增厚，脱落慢或不完全， 以致出血量多或时间延长，形成异常子宫出血症状。 3. GnRHa 作用后，正常子宫肌层平滑肌细胞及子宫肌瘤细胞凋亡率均有不同程 度的增加，这为 GnRH 的自分泌/旁分泌调节功能提供了更有力的佐证。同时，较之 正常子宫肌层平滑肌细胞，GnRHa 显著增加了子宫肌瘤细胞的凋亡率，这为 GnRHa 缩小子宫肌瘤的可能机制寻找了实验依据。 4. GnRHa 作用后，体外培养的有异常子宫出血症状的子宫肌瘤内膜细胞（无合 并子宫内膜病变）的凋亡率显著高于正常子宫内