促红细胞生成素对玻璃体腔注射神经酰胺诱导大鼠视网膜损伤保护作用及机理-眼科学专业论文.docxVIP

学位论文使用授权声明 本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定， 即:学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸 质论文的内容 一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信 息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中 国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文 档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保 存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索。 涉密论文口 本学位论文属 在一一一年 一一月解密后适用本规定。 非涉密论文口 、、 论文作者签名 : 加以 日期:dpυ)-旷 导师签名 : 作/何主〉日期: 促红细胞生成素对玻璃体腔注射神经酰胺诱导大鼠视网 膜损伤的保护作用及机理 中文摘要 目的：探讨重组人促红细胞生成素（EPO）对玻璃体腔注射神经酰胺诱导大鼠视 网膜视神经损伤的保护作用及其机制。 方法：SD 大鼠随机分为 4 组（6 只/组）：即正常对照组、DMSO 处理组、神经 酰胺 2(C2)处理组和 C2+EPO（Erythropoietin，人促红细胞生成素）治疗组。通过玻 璃体腔注射 C2 来诱导视网膜损伤，并且检测玻璃体腔注射 EPO 对 C2 诱导视网膜损 伤的保护作用。在 C2 + EPO 治疗组，SD 大鼠 C2 玻璃体腔给药三天后再通过眼内注 射 EPO 进行治疗。使用闪光视网膜电图（f–ERG）来检测经不同处理大鼠的视网膜 功能、TUNEL 法检测视网膜细胞凋亡、TEER (Trans–endothelial Electrical Resistance) 检测人视网膜微血管内皮细胞（ Human retinal microvascular endothelial cells ， HRMECs）的跨内皮电阻。并且采用免疫荧光和 Q–PCR 来检测 GFAP（Glial fibrillary acidic protein，神经胶质酸性蛋白）和血–视网膜屏障（blood–retinal barrier，BRB） 相关因子在 R28 细胞中转录水平（mRNA）的改变。 结果：相比于正常对照组和 DMSO 处理组，ERG 的结果显示，C2 处理组的大鼠 ERG b 波波幅显著降低；TUNEL 结果表明，视网膜神经节细胞层（GCL）TUNEL 阳性的细胞数量显著增多；视网膜 GFAP 免疫荧光染色明显增强，提示胶质细胞的活 化增多。EPO 治疗后，ERG b 波振幅显著升高、GFAP 表达降低、活化的胶质细胞数 量减少、GCL 层的细胞凋亡显著减少。体外研究显示，R28 细胞经 C2 处理后，细胞 存活率显著降低，并与 C2 呈剂量依赖性。C2 能显著降低原代人视网膜微血管内皮细 胞间紧密连接的完整性，表现为跨内皮电阻（TEER）的降低，EPO 治疗能够上调 TEER。R28 细胞经 C2 处理 48 小时后，Q–PCR 结果显示质膜小泡相关蛋白 （plasmalemma vesicle associated protein, PLVAP，PV–1）、集群分化因子 73（cluster of differentiation 73 ， CD73 ）和细胞间粘附分子 1 （ intercellular adhesion molecule, ICAM–1）在转录水平（mRNA）的表达显著增加，并且在 EPO 治疗后显著降低。 结论：C2 眼内注射能引起视网膜损伤，主要通过升高 PV–1、CD73 和 ICAM–1 的表达来诱导的视网膜细胞凋亡和血–视网膜内屏障的破坏。初步实验结果表明，EPO 对神经酰胺诱导的视网膜神经损伤具有保护作用。 关键词：促红细胞生成素，神经酰胺，视网膜损伤，血–视网膜内屏障（BRB） 作 者：康道欢 指导教师：徐国旭 The Efficacy and Mechanisms of Erythropoietin Protects Retina from intravitreal injection of Ceramide 2 induced Retinal Damage in Rat Abstract Purpose: To investigate the protective effect and possible mechanism of erythropoietin (EPO) in ceramide 2 (C2) induced retinal damage in rat. Methods: Male Sprague–Dawley (SD) rats were randomly divided into 4 groups (n=6 in each gro