发挥抗乙肝病毒作用初步研究-内科学(感染病学)专业论文.docx

蛇葡萄根乙醇提取物通过 p53 信号通路 发挥抗乙肝病毒作用初步研究 中文摘要 第一部分 蛇葡萄根乙醇提取物抗乙肝病毒效应研究 目的 初步探讨蛇葡萄根 Ampelopsis sinica W．T．Wang 体外抗乙肝病毒效果。 方法 以 HBV 全基因组转染的人肝癌细胞系 HepG2 2.2.15 作为抗病毒细胞模 型，首先采用细胞病变效应检测法以及 MTT 法检测蛇葡萄根对该细胞的毒性作 用，然后加入不同无毒浓度蛇葡萄根对细胞进行不同时间的干预。ELISA 法和实 时荧光定量 PCR 法分别检测上清液中 HBsAg、HBeAg 的分泌量和 HBV DNA 含 量。 结果 200μg/ml 及 200μg/ml 以下浓度蛇葡萄根对 HepG2 2.2.15 的活性没有显 著影响（P 0.05）。在无毒浓度范围内，不同浓度蛇葡萄根干预细胞后细胞所分 泌的 HBsAg、HBeAg 和 HBV DNA 水平较未干预组低（P 0.05），且药物浓度 越高，对 HBsAg、HBeAg 和 HBV DNA 的分泌抑制作用越明显，呈浓度依赖性。 但与作用时间没有明显依赖关系。 结论 蛇葡萄根通过抑制 HBsAg、HBeAg 和 HBV DNA 的分泌而初步显示其 抗病毒效果。为临床抗病毒药物的研究提供了一定的理论依据。 关键词 蛇葡萄根；HBV；HBsAg；HBeAg；HBV DNA 第二部分 蛇葡萄根乙醇提取物基于荧光素酶报告基因的 抗乙肝病毒作用机制初步研究 目的 为了明确蛇葡萄根抗病毒的作用机制。 方法 首先对蛇葡萄根抗乙肝病毒过程中的信号通路进行筛选，以带有荧光 I 素酶报告基因的 PathDetect Cis-/Trans- Reporting Systems （ pNFκB-Luc ， pAP-1-Luc ， pISRE-Luc ， p53-Luc ， pFA2-Elk1 ， pFA2-cJun ， pFA2-CHOP ， pFA2-CREB，pFR-Luc）转染 HepG2 细胞，蛇葡萄根干预后，检测荧光素酶活 性，并用流式细胞仪检测蛇葡萄根干预 HepG2 2.2.15 细胞 48h 后，细胞凋亡情 况；然后从 HBV 转录水平来阐明问题，我们构建了五种带有荧光素酶报告基因 的 HBV 启动子质粒（Cp, Xp, S1p, S2p 和 Fp）以及五个启动子截短报告质粒， 并分别转入人肝癌细胞系 HepG2，蛇葡萄根干预后检测荧光素酶活性。 结果 蛇葡萄根能够抑制 p53 的活性（P 0.05），对 HepG2 2.2.15 细胞具有 促凋亡作用；蛇葡萄根能选择性抑制 HepG2 细胞中 HBV 启动子活性（Cp，S1p 和 Fp）（P 0.05）以及截短质粒 t1，t4 和 t5 的活性（P 0.05）。 结论 蛇葡萄根的抗病毒作用可能与其抑制 HBV 转录及 p53 通路有关，并且 可能是通过抑制 p53 通路诱导细胞凋亡从而抑制病毒复制。 关键词 蛇葡萄根；信号通路；凋亡；启动子；截短 第三部分 蛇葡萄根的提取工艺 目的 为了促进蛇葡萄根的深入开发和为临床进程提供科学依据。对该药用植 物的各种提取制备工艺做一简述及比较。 方法 采用水煮法、回流法、渗漉法等 5 项提取工艺分别提取蛇葡萄根，测定 提取液所含的小分子水溶性指标性成分没食子酸和提取物的干浸膏量。 结果 以本实验推荐的 5#工艺方法提取的提取物，其杂质减少了约 70%，但 提取液中小分子水溶性指标性成分没食子酸的含量没有明显差异。 结论 用该工艺最终制备的蛇葡萄根提取液或干浸膏中有效物质的纯度相对 于水煮液和仅仅用醇提的粗提取物大大提高。用该工艺方法提取精制的蛇葡萄根 制成 0.8g/ml 的生药提取液，澄明度增高，可以直接制备溶液剂（水或醇的粗提 取物均为混悬剂）。尤其是该溶液去掉了有一定刺激性的粘液质成分，同时，通 过最大限度去掉粘液质和鞣质等杂质，其细胞毒性大为降低。 关键词 蛇葡萄根；提取工艺 Anti-hepatitis B virus activity of ethanol extract from Ampelopsis Sinica Root via p53 signaling pathway Abstract Part 1 Preliminary research on anti- hepatitis B virus effects of Ampelopsis Sinica Root in vitro Objective: The present study was performed in order to investigate the anti-HBV activity of the ethanol e