促炎症消退脂质介质对干眼性别特异性及对眼表炎症消退调控的研究-临床医学专业论文.docx

学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 保密 ，在 年解密后适用本授权书。 本论文属于  不保密 。 （请在相对应的方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日 中文摘要 目的 干眼是临床中较为常见的炎症性和自发性免疫眼表疾病。由于干眼致病因 素及发病机制较为复杂，临床中尚无针对病因的有效治疗药物。近年来促炎症 消退脂质介质的抗炎和促进炎症消散的作用已得到广泛认同，并开始应用于临 床中炎性疾病的治疗，但其对于干眼的治疗效果至今尚无充分的动物实验证据 及相关机制探讨。因此，本实验在首先建立泪液蒸发过强合并分泌不足型干眼 鼠模型的基础上，研究干眼病中眼睑及结膜组织内促炎症消退脂质介质的变化 特点及其性别特异性差异，同时对消退素 D1 在实验性干眼愈合阶段对眼表病变 的影响及调控机制进行分析和研究。 方法 1. 干眼鼠模型的建立及其有效性评价 选取实验动物 6-8 周龄 C57BL/6 雌鼠 20 只。随机分为 4 组，其中 3 组分别 建立 3、5 及 10 天干眼鼠模型，另一组设为正常对照。温度、湿度和风速分别 控制在 24-28℃、30%-35%和 15L/min，用以模拟干燥环境。同时小鼠皮下注射 氢溴酸东莨菪碱（1mg/100μl）以减少其自身泪液分泌。对照组小鼠置于正常环 境中（温度 24-28℃、湿度 40%-50%，无气流），无任何药物干预。角膜上皮荧 光染色评分，泪液分泌量及结膜杯状细胞密度等为有效性评价指标。 2. 干眼对于眼睑组织中脂质介质的影响及其性别差异性的研究 在第一部分研究基础上，建立鼠干眼模型。选取雌雄小鼠各 15 只，随机分 为正常对照组、造模 5 天组和 10 天组。使用 LC-MS/MS 系统对样本进行脂质分 析。利用髓过氧化酶（MPO）活性实验，流式细胞术，实时定量荧光聚合酶链 式反应（Real-time PCR）及组织学观察等手段研究干眼对组织中细胞及分子水 平的影响。 I 3. 消退素 RvD1 在实验性干眼愈合阶段对眼表病变的影响及调控作用 选取实验动物 6-8 周龄 C57BL/6 雌鼠 20 只，随机分为正常对照组，干眼造 模 10 天组，RvD1 干预愈合组，及愈合对照组。其中两个愈合组的小鼠在经过 10 天造模处理后，放回正常环境中，并分别在 5 天愈合期内给予 RvD1 或安慰剂 利用 MPO 活性实验和流式细胞术分别检测 PMN 和 CD4+T 细胞在泪腺组织中的 含量。 结果 1. 在实验动物眼，小鼠角膜上皮荧光染色评分中，造模 5 天组与正常对照组相 比，从（0.8±0.49）分上升至（6.35±0.03）分，具有显著统计学差异（P0.05）。 泪液分泌量在造模 3 天、5 天和 10 天组中与对照组相比均有显著性下降。组织 学切片显现上睑、穹窿结膜杯状细胞在造模组内数量减少，且胞浆较小。对照 组结膜杯状细胞密度为（26.92±1.10）个/100μm，造模 10 天组仅为（17.73±1.65） 个/100μm，差异有统计学意义（P0.01）。 2. 正常雌雄小鼠的眼睑及结膜组织中检测到促炎症消退脂质介质的表达。其 中，DHA，17-HDHA 及 LXA4 在雌鼠眼睑中的含量明显高于雄鼠（P0.0232）。 与正常对照组相比，雌鼠在造模 5 天后，其结膜杯状细胞密度比对照组下降(35.34 ±0.06)%，而雄鼠造模 5 天时结膜杯状细胞密度比其对照组下降(51.09±0.02)%。 同时，催化促炎性脂质介质合成的环氧化酶 COX-2 mRNA 在雌雄干眼模型鼠的 眼睑中相对表达量比正常对照组分别增加了（17.20±3.57）倍和（14.9±2.22） 倍，差异均具有统计学意义（P0.003）。在干眼影响下，花生四烯酸（AA）源 性促炎症消退脂质介质（LXA4）在雄鼠眼睑中的表达量明显高于雌鼠（P=0.02）， 而ω-3 多不饱和脂肪酸源性促炎症消退脂质介质（DHA、4-HDHA、17-HDHA） 在干眼雌鼠中的含量多于雄鼠（P0.02）。细胞学分析显示，雌鼠结