二烯丙基二硫对LIMK1高表达人结肠癌SW480细胞的影响-消化内科学专业论文.docxVIP

主要英文缩略语索引 英文缩写 英文全称 中文全称 DADS diallyl disulfide 二烯丙基二硫 PBS phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液 PMSF Phenymethansulfonyl fluride 胰凝乳蛋白酶 BCA Bicinchoninic acide 二喹啉甲酸 SDS–PAGE Sodium dodecyl sulfate- polyacrylamide gel electrophoresis 十二烷基硫酸钠-丙烯酰胺 凝胶电泳 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 IR inhibition ratio 抑制率 MTT tihiazolyl blue 噻唑蓝 DEPC diethyl pyrocardonate 焦碳酸二乙酯 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction 逆转录 PCR LIMK1 LIM kinase1 丝氨酸蛋白激酶 1 ADF actin-depolymerizing factor 肌动蛋白解聚因子 ROCK1 UPA-associated kinase 1 UPA 蛋白相关激酶 1 Pak1 p21-activated kinases 1 p21 活化激酶 1 SW480 Human colon cancer SW480 cell line 人结肠癌 SW480 细胞系 cyclin B1 cyclin B1 细胞周期蛋白 B1 bp basepair(s) 碱基对 SSH Slingshot phosphatase 弹弓蛋白 MAPK mitogen-activated protein kinase 有丝分裂活化蛋白激酶 EMT epithelial mesenchymal transitions 上皮-间质转化 1 二烯丙基二硫对 LIMK1 高表达人结肠癌 SW480 细胞的影响 硕士研究生：潘志兵 导 师：苏琦 教授 廖爱军 教授 中 文 摘 要 目的：研究二烯丙基二硫（DADS）及 LIMK1 高表达对人结肠癌 SW480 细胞细胞生物学特性的影响，观察 DADS 和 LIMK1 对裸鼠体内 SW480 细胞成 瘤的影响，探讨 DADS 抑制 SW480 细胞增殖、迁移与侵袭的分子机制。 方法： 构 建 含 有 编 码 人 LIMK1 蛋白的 LIMK1 基因 CDS 序列的 PIRES2-LIMK1 真核表达载体。将 PIRES2-LIMK1 真核表达载体转染 SW480 细 胞，建立 LIMK1 蛋白高表达稳定转染细胞 LIMK1/SW480 细胞。RT-PCR、Western blot 检测 DADS 处理前后，LIMK1 高表达对 SW480 细胞 LIMK1mRNA 及蛋白 表达。MTT 法、流式细胞术、划痕实验和 Transwell 侵袭实验检测 DADS 处理前 后，LIMK1 高表达对 SW480 细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响。 裸鼠皮下注入 SW480 细胞、LIMK1 高表达细胞、LIMK1 干扰细胞分别体 外未处理和 DADS 处理 24h 后，建立人结肠癌异种移植模型。观察移植瘤生长 情况，测量重量与体积，计算抑瘤率，免疫组化分析 Vimentin、P53、Ki-67、CD34、 E-cadherin 蛋白表达。 结果： 1．成功构建 LIMK1 蛋白高表达稳定转染 LIMK1/SW480 细胞。 酶 切 和 测 序 结 果 证 实 ， 成 功 构 建 PIRES2-LIMK1 真核表达载体。 PIRES2-LIMK1 真核表达载体转染 SW480 细胞，经 G418 刷选 2 周后，免疫荧光 显微镜下示转染细胞的胞浆内发绿色荧光，RT-PCR 和 Western blotting 检测显示， LIMK1/SW480 细胞中 LIMK1 mRNA 和蛋白表达量增高（P0.05），提示成功获 得 LIMK1 高表达的稳定细胞株 LIMK1/SW480。 2．DADS 可下调 LIMK1 mRNA 和蛋白表达，可抑制 LIMK1 和 cofilin1 的 2 磷酸化，LIMK1 过表达可促进 cofilin1 的磷酸化。 RT-PCR 和 Western blot 检测显示， LIMK1 过表达组、空载体组、SW480 组 分别加入 45mg· L-1 DADS 作用 24 小时后，LIMK1 mRNA 和蛋白表达量明显降 低（P0.05），p-LIMK1 和 P-cofilin1 明显减少（P0.0