二穗短柄草BdWRKY55和BdWRKY83基因的克隆、表达分析及遗传转化研究-生物工程专业论文.docxVIP

二穗短柄草BdWRKY55和BdWRKY83基因的克隆、表达分析及遗传转化研究-生物工程专业论文.docx

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二穗短柄草BdWRKY55和BdWRKY83基因的克隆、表达分析及遗传转化研究-生物工程专业论文

独创性声明 本人声明所呈交的学 位论文是我个 人在导师指导下 进行的研究工 作及取得 的研究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他 个人或集体已经发表或撰 写过的研究成果 。对本文的研究 做出贡献的个人和集 体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名: 日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。 本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密□, 在 年解密后适用本授权书。 本论文属于 不保密□。 (请在以上方框内打“√”) 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期: 年 月 日 日期: 年 月 日 摘 要 各种非生物逆境胁迫包括干旱、高盐、极端温度等严重影响植物的正常生长和 发育,特别是对农作物产量和品质的影响尤为突出。植物在长期进化过程中形成了 精细的调节机制,如通过转录因子激活或抑制下游基因的表达,调控胁迫响应相关 基因的表达,进而适应这些不良的环境变化。高等植物基因组中包含几十个转录因 子家族,WRKY 转录因子家族就是其中之一。二穗短柄(Brachygodium distachyon) 是新兴的禾本科模式生物,与小麦具有较近的亲缘关系,因此对二穗短柄草 WRKY 基因的克隆以及功能研究,有助于麦类作物 WRKY 基因功能研究及遗传改良。 本研究以二穗短柄草为实验材料,成功克隆了 BdWRKY55 和 BdWRKY83 两个基 因;利用半定量 RT-PCR 技术检测了这两个 BdWRKYs 基因在非生物逆境胁迫及信号 分子处理下的表达变化;通过基因枪轰击洋葱表皮细胞获得这两个转录因子-GFP 融 合蛋白在洋葱细胞中的亚细胞定位情况;利用农杆菌介导的遗传转化技术,获得了 两个 BdWRKYs 基因过表达的转基因烟草。具体研究内容和结果如下: (1)通过对二穗短柄草基因组序列检索分析,采用 RT-PCR 技术,克隆了两个 WRKY 基因家族成员,并分别命名为 BdWRKY55 和 BdWRKY83;序列比对分析表明, 二者均属于类型 III WRKY 成员。 (2)通过洋葱表皮细胞的瞬时表达实验对 BdWRKY55 和 BdWRK Y83 转录因 子进行了亚细胞定位分析,结果显示这两个转录因子均定位于细胞核。 (3)通过半定量 RT-PCR 检测了 BdWRKY55 和 BdWRKY83 基因在二穗短柄草 不同器官的表达情况和在干旱、高盐、极端温度等非生物逆境胁迫以及 ABA 和 H2O2 信号分子处理下的表达水平变化。结果表明,在检测的所有组织中,BdWRKY55 和 BdWRKY83 均有不同水平的表达,但二者均在叶片中表达量最高。BdWRKY55 和 BdWRKY83 基因对不同的逆境胁迫及信号分子处理有不同的响应,PEG、ABA、H2O2、 冷和热处理对 BdWRKY55 基因的表达有不同程度的下调,除冷处理外,其余处理均 能上调 BdWRKY83 基因的表达。 (4)利用农杆菌介导的遗传转化技术,获得了 BdWRKY55 和 BdWRKY83 基因 过表达的转基因烟草。初步表型分析结果表明,过表达 BdWRKY83 可提高转基因烟 草对干旱胁迫的耐受性。 以上研究结果为进一步揭示 BdWRKY55 和 BdWRKY83 基因的生物学功能奠定了 基础。 关键词:二穗短柄草,WRKY 转录因子,非生物胁迫,表达分析,瞬时表达,遗传 转化 Abstract Various abiotic stresses including drought, high salinity, extreme temperature, etc. severely affect plant growth and development, and decrease the productivity and quality of crops. During long-time evolution process, plants have developed elaborate metabolisms e.g. by activating transcriptional factors to enhance or inhibit downstream genes’ expression, and adapt to those environmental changes. WRKY transcriptional factors h

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