多因素联合基因治疗对H22实体瘤生长抑制作用的初步探讨-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

主要缩略词表 缩略词 IFN 英文名称 Interferon 中文名称 干扰素 TNF Tumor Necrosis Factor 肿瘤坏死因子 DCs AMP Dendritic cells Ampicillin 树突状细胞 氨苄西林 IL Interleukin 白细胞介素 PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链式反应 Th 细胞 T helper cell 辅助性 T 细胞 PBS Phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液 LB Luria-Bertani LB 培养基 TGF-β Transforming growth factor β 转化生长因子 β 多因素联合基因治疗对 H22 实体瘤 生长抑制作用的初步探讨 硕士研究生：周 昀 指导教师：张桂梅教授 冯作化教授 中文摘要 目的：本文拟采用 pcDNA3.1-IFN-β、pcDNA3.1-TNF-α、pcDNA3.1 -CXCL-1 和 pcDNA3.1-CH510 治疗质粒转染小鼠 H22 细胞，探讨不同浓度， 不同组合的治疗方案对 H22 实体瘤生长的抑制作用，寻求治疗 H22 实体瘤的最 佳治疗方案。 方法：(1)以 H22 肝癌细胞接种于 BALB/c 小鼠右后腿肌肉内，建立实 验性小鼠肿瘤模型。(2)采用裸质粒 DNA 原位注射法让质粒 pcDNA3.1-IFN-β、 pcDNA3.1-TNF-α、pcDNA3.1-CXCL-1 和 pcDNA3.1-CH510 在肿瘤原位表达 相应的产物 IFN-β、TNF-α、CXCL-1、CH50。(3)采用裸质粒 DNA 尾静脉注 射法实现荷瘤鼠肝内转染质粒 pcDNA3.1-IFN-β 进行基因治疗。(4)通过比较 肿瘤瘤重观察不同组别治疗方案的效果。(5)评估出各种基因的最适浓度后，将 各种基因进行联合治疗荷瘤小鼠，观察联合治疗方案中肿瘤生长抑制率与单独每 个基因的肿瘤生长抑制率，评价联合治疗的效果。 结果：(1) pcDNA3.1-IFN-β 质粒分别通过肿瘤接种原位肌肉注射和尾静脉 注射，浓度设置为 50 μg /100 μl，100 μg/100 μl，200 μg/100 μl，结果显示尾静脉 注射 100 μg/100 μl 为合适的治疗方案，既对肿瘤的生长有明显的抑制作用（40% 左右），同时毒副作用较小。(2) pcDNA3.1-TNF-α 质粒通过肿瘤接种原位肌肉 注射，浓度设置为 10 μg/100 μl，30 μg/100 μl，50 μg/100 μl，100 μg/100 μl，结 果显示最适治疗方案为肿瘤接种原位肌肉注射 10 μg，抑制肿瘤生长率为 70%。 (3) pcDNA3.1 -CXCL-1 质粒肌肉注射于肿瘤接种原位，浓度设置为 5 μg/100 μl， 10 μg/100 μl，30 μg/100 μl，50 μg/100 μl，100 μg/100 μl 实验结果显示 10 μg/100 μl 即可抑制肿瘤生长 40%左右。(4)将 pcDNA3.1-IFN-β、pcDNA3.1-TNF-α、 pcDNA3.1 -CXCL-1 三种质粒联合对荷瘤鼠进行治疗，可以得到比单独使用任 何一种基因治疗都强的抑制效果，肿瘤生长抑制率能够达到 80%。(5)在以上三 种质粒联合治疗的基础上，我们另加入 50 μg 的 pcDNA3.1-CH510 质粒注射到 肿瘤接种部位，联合运用于 H22 肿瘤模型中进行治疗，可观察到肿瘤生长抑制 在 90%以上，甚至治疗组内部分小鼠肿瘤接种部位根本触摸不到肿瘤的生长。 结论：将多种具有抗癌效果的细胞因子的基因以小剂量，多种方式组合在一 起对肿瘤进行综合治疗，比单一基因治疗的效果好。 【关键词】肿瘤治疗；基因治疗；联合治疗；IFN-β；TNF-α；CXCL-1 Preliminary Study On Therapeutic Effect of Combination of Several Genes on the Growth of H22 Tumor Abstract Objective: To investigate the inhibitory effect of combination of several different cytokine genes on the H22 tumor.Analyzing the best concentrate and combination of the gene therapy on H22 tumor. Methods: (1) Tumor model was established by inoculation of H22 hepa