促红细胞生成素对神经血管单元缺血缺氧损伤后的血管新生和神经保护作用研究-神经病学专业论文.docxVIP

摘要 II 重组人促红细胞生成素对体外神经血管单元缺血缺氧损伤 的保护作用研究 目的 探讨重组人促红细胞生成素(rH-EPO)对体外神经血管单元（NVU）缺血 缺氧损伤的保护作用及其可能机制。 方法 用 EA.hy 926、U 87、SH-SY5Y 三种细胞株共培养构建体外 NVU，并验 证其与在体单元在结构与功能上的相似性。氧糖剥夺法（OGD）制作 NVU 缺 血缺氧损伤模型，观察复氧复糖同时行 rH-EPO (1 U/ml 和 5 U/ml)干预对受损 NVU 不同细胞成分的影响：光化学法测定 EA.hy 926 和 SH-SY5Y 胞浆内氧化 （MDA）与抗氧化（SOD）指标变化；AnnexinⅤ-FITC/PI 双染行流式细胞仪 检测 EA.hy 926 和 SH-SY5Y 细胞凋亡率；逆转录 PCR 法分析 SH-SY5Y 胞浆内 Caspase-3 mRNA 表达变化；细胞免疫荧光法分析 SH-SY5Y 胞浆中诱导性一氧 化氮合酶（iNOS）的蛋白表达变化。 结果 三种细胞共培养 7d 后，内皮细胞阳性表达血脑屏障（BBB）特异性酶， 且跨内皮细胞阻抗达峰，而通透性最低。OGD 使 EA.hy 926 和 SH-SY5Y 两种 细胞凋亡率均明显上升，MDA 含量增多、SOD 活性降低， SH-SY5Y 胞浆内 Caspase-3 mRNA 和 iNOS 蛋白表达均增多；但 rH-EPO 干预可逆转上述变化， 表现为干预后的细胞凋亡明显减少、MDA 含量下降、SOD 活性增高(P0.05)， 且 Caspase-3 与 iNOS 表达显著下降(均 P0.05)。 结论 本研究构建的体外 NVU 具备体内单元的基本结构及功能特征；rH-EPO 后处理能改善 OGD 诱导的细胞损伤，其机制可能与 rH-EPO 减少细胞凋亡并调 节凋亡基因表达、抗自由基损伤、调节 iNOS 表达等有关。 【关键词】 重组人促红细胞生成素；体外神经血管单元；细胞共培养；氧糖剥 夺；血脑屏障 ；脑保护；后处理 Abstract Part I Angiogenic Role of Recombinant Human Erythropoietin on EA.hy926 Cell Line: an in vitro Study Objective To study the angiogenic role of recombinant human erythropoietin (rH-EPO) on EA.hy 926 cells after oxygen and glucose deprivation followed by reoxygenation (OGD/R) in vitro. Methods Cells were subjected to OGD and stimulated by rH-EPO at the beginning of the reoxygenation procedure. MTT assay, Transwell assay and Matrigel assay were used to detect the angiogenic ability of cells post-OGD. The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF), endothelial nitric oxide synthase (eNOS) mRNA and eNOS protein were also detected. Results OGD induced a significant decrease of proliferation, migration, and tube formation ability of EA.hy 926 cells and the expression of VEGF, eNOS mRNA and protein were significantly decreased. rH-EPO lessened the OGD-induced damage of proliferation, migration, and tube formation ability of cells and increased the expression of VEGF, eNOS mRNA and protein. Conclusion VEGF and eNOS probably play critical roles in the angiogenic effects of rH-EPO on cells post-OGD in v