儿童急性白血病的实验及临床回顾性研究-儿科学专业论文.docx

儿童急性白血病的实验及临床回顾性研究 华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科 博士研究生：熊 昊 导 师：胡群 教授 中文摘要 第一部分 小檗碱对 Jurkat 细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制的研究 目的 小檗碱（berberine，BBR）又名黄连素，近年来的药理学研究显示出其具有良好的抗 肿瘤作用。我们先前的研究表明，小檗碱可协同 TRAIL 诱导白血病细胞凋亡，且其分子 机制可能涉及抑制 NF-κB/P65 表达和 caspase3，caspase8 剪切活化。但是尚不清楚其他 基因如 P53 或者 MDM2 是否参与小檗碱的这种作用。而 Survivin 是近年来研究较为热门 的凋亡抑制蛋白家族成员之一，具有抑制凋亡、调节分化的双向作用，在正常的人体组 织细胞几乎不表达。近年来又发现 survivin 的异构体 survivin-2B 和 survivin-△Ex3 对于癌 症发生和发展中的生物学功能和作用与 survivin 并不一致。而 survivin 及异构体与 MDM2、 P53 之间的相互作用机制也不清楚。因此本研究的目的： 1、小檗碱对 Jurkat 细胞的增殖、凋亡的影响及其分子生物学机制； 2、小檗碱对 Jurkat 细胞的作用机制是否不同于传统化疗药物柔红霉素。 方法 培养 Jurkat 细胞分为（1）空白对照组；（2）小檗碱组（25μM、50μM、100μM）；（3） 柔红霉素对照组（0.1mg/L，1mg/L，10 mg/L）；分别培养 12、24h 后取样本用于后续实 验。利用 CCK-8 法检测小檗碱及柔红霉素对每组 Jurkat 细胞的生长抑制率；同时采用流 式细胞术 AnnexinⅤ/PI 染色法检测其诱导 Jurkat 细胞凋亡的影响。用 Real-time PCR 及 Western-blot 方法检测小檗碱及柔红霉素作用 Jurkat 细胞后 Survivin 及其异构体 Survivin-2B 和 Survivin-△Ex3 与 MDM2、P53 基因表达 mRNA 与蛋白的变化。 结果 1、 小檗碱具有明显抑制 Jurkat 细胞增殖并促进其凋亡的作用，其作用具有浓度依赖 性与时间依赖性，呈现出随浓度增加和作用时间延长表现出明显增加的抑制率 和凋亡率，与柔红霉素作用 Jurkat 细胞所表现的的趋势一致。 2、 小檗碱抑制 Survivin 及其异构体 Survivin-△Ex3 的表达，促进 Survivin-2B 表达， 具有时间依赖性和浓度依赖性，柔红霉素也表现出时间依赖性与浓度依赖性； 但是二者的作用并不同步。 3、 小檗碱促进 P53 表达，表现出与柔红霉素一致的时间依赖性，但是对于浓度依赖 性二者表达并不一致。 4、 小檗碱抑制 MDM2 的表达，表现出时间依赖性，没有浓度依赖性；而柔红霉素 抑制 MDM2 表达表现出不完全时间依赖性和浓度依赖性。 结论 小檗碱作用 Jurkat 细胞后通过下调 Survivin、Survivin-△Ex3、MDM2 的表达，上 调 Survivin-2B、P53 的表达从而抑制其增殖并促进凋亡，呈不完全的时间依赖性和浓 度依赖性，与柔红霉素作用机制并不一致，提示小檗碱治疗对柔红霉素耐药的白血病 细胞，或者与柔红霉素联合治疗白血病可能具有一定的临床价值。 关键词 Survivin；异构体；MDM2；P53；凋亡；小檗碱；柔红霉素；急性淋巴细胞白血病 第二部分 几种较为特殊类型儿童急性白血病的临床回顾性研究 （一）新生儿一过性骨髓增殖异常：单中心回顾性研究 背景 21-三体异常的新生儿大约有 10%可能会出现一过性骨髓增殖异常（Transient Abnomal Myelopoiesis, TAM），表现为在出生后的最初的数天时间内外周血出现并迅速 积聚大量的原始细胞，并可能在数周至数月内自行消失。其中 20~30%的患儿在今后数年 内继发急性巨核细胞白血病（acute megakaryoblastic leukemia，AMKL)。 目的 探索中国新生儿 21-三体染色体异常合并一过性骨髓增殖异常的自然病程，以及继发 性 AMKL 的临床特征、治疗方法与长期预后。 方法 回顾性分析了在香港大学李嘉诚医学院玛丽医院收治并随访的 4 名 21-三体异常合并 一过性骨髓增殖异常的新生儿 。 结果 21-三体是这 4 例 TAM 病人原始细胞唯一确认的染色体异常。4 名病人均在未接受 化疗、仅接受对症治疗后外周血原始细胞自行消失，血细胞计数同时恢复正常。有 3 名 病人继发 AMKL，其诊断为 AMKL 的平均年龄为 15 个月；他们均接受了化疗治疗。这 3 名病人均维持至少 6 年的完全缓解。另外一名未继发 AMKL 的病人仅在其原始