儿菜MAX途径相关基因的克隆及表达分析-植物学专业论文.docxVIP

摘 要 儿菜(Brassica juncea var. gemmifera Lin.)是芥菜的一个变种，是一种长江流域 普遍种植的蔬菜作物，属十字花科芸薹属。儿菜的生产主要集中在长江流域，其 他地区并没有普及，产量不足以供应给其他地区。如果能提高其产量，对增加儿 菜的供应量，满足市场需要具有重要的意义。利用分子生物学技术研究其侧芽（即 儿菜的可食用部分）相关基因的表达，对于提高儿菜的产量提供技术支持。 通过对拟南芥突变体的分析，发现在拟南芥中有一个调控植物侧芽发生的途 径，即 MAX 途径。该途径包含了 MAX1，MAX2，MAX3，MAX4 基因的调控以 及与生长素，细胞分类素和独脚金萌发素内酯三种激素的相互作用。目前，这些 基因在豌豆，牵牛花和水稻中都有同源基因被克隆。本课题以儿菜和芥菜侧芽的 表型特征和分子生物学特性为基础，重点对控制侧芽发生的 MAX 途径相关的几个 基因进行研究。目前对儿菜中的这类基因研究还没有。我们以野生型儿菜和芥菜 为材料对儿菜侧芽相关基因进行了研究，主要研究结果如下： （1）利用 RT-PCR 的方法在儿菜和芥菜根、侧芽等组织的 mRNA 中扩增相关 基因片段，得到其 cDNA 序列，分别命名为 eMAX2，eMAX3 和 eMAX4 及 jMAX2， jMAX3 和 jMAX4。与拟南芥相关基因的同源性分别为 MAX2 84%，MAX3 56%， MAX4 87%。eMAX2 和 jMAX2 基因片段，eMAX3 和 jMAX3 基因片段的核苷酸序列 完全一致，而 eMAX4 基因片段相对于 jMAX4 基因片段发生了几个点突变。 （2）以儿菜和芥菜 Actin 基因的特异表达为参照，通过半定量 RT-PCR 分析， 研究儿菜 eMAX2，eMAX3 和 eMAX4 基因与芥菜 jMAX2，jMAX3 和 jMAX4 基因的 表达模式差异，结果表明 MAX2 基因在芥菜中的表达量明显高于在儿菜中的表达 量，而 MAX3 基因和 MAX4 基因在儿菜和芥菜中的表达量几乎没有差别。 （3）对儿菜和芥菜分别用生长素，细胞分裂素，独脚金萌发素内酯进行处理， 然后通过半定量 RT-PCR 分析，研究这三种激素对 MAX 途径相关基因表达模式的 影响，结果表明 IAA 和 ZT 对于 MAX 途径的相关基因没有直接的作用，而对儿菜 和芥菜进行独脚金萌发素内酯处理后，MAX2 基因的表达量有略微的增加，而 MAX3 和 MAX4 的表达量却没有什么明显的变化。 关键词：MAX 途径，侧芽，半定量 RT-PCR，激素 ABSTRACT Brassica juncea var. gemmifera Lin. is a kind of mustard mutants and belongs to Cruciferae Brassica, mainly growing in the region near the Yangtze River. Because it is not commonly grown in other place, the production of Brassica juncea var. gemmifera Lin.is limited and cannot meet the demand for supplying the whole country. However, if we can increase the production, it has significant meaning to commercial popularizing. Utilizing molecular biology techniques, it can be done to extract the gene controlling its lateral bud growth and clear its expression pathway and this research will help to increase the production of Brassica juncea var. gemmifera Lin. Through the analysis of Arabidopsis mutants, researchers found a pathway that regulates lateral bud growth, as known as MAX pathway. This pathway includes regulation of gene MAX1, MAX2, MAX3, MAX4 and interaction among auxins, cytokinins an