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朵丽蝶兰成花关键基因DhCOL的克隆和功能验证-园林植物与观赏园艺专业论文
独 创 性 声 明
本人声明,所呈交的学位论文,是受国家自然科学基金项目(编号资助,在 指导教师指导下,通过我的努力取得的成果,并且是自己撰写的。尽我所知,除了文中作了标 注和致谢中已经作了答谢的地方外,论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果,也不包含 在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献 的同志,都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为, 由本人承担应有的责任。
学位论文作者亲笔签名: 日 期:
论文使用授权的说明
本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定,即学校有权送交论文的复印 件,允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其 他复制手段保存论文。
保密,在 年后解密可适用本授权书。□
不保密, 本学位论文属于不保密。 □
(请在方框内打“√”)
学位论文作者亲笔签名: 日 期:
指导教师亲笔签名: 日 期:
摘要
摘要
朵丽蝶兰(Doritaenopsis)为蝴蝶兰属(Phalaenopsis)与朵丽兰属(Doritis) 杂交属统称,与传统的蝴蝶兰相比,具有较高的观赏价值和经济价值。本研究以 朵丽蝶兰(Doritaenopsis‘Tinny Tender’)为试材,克隆了 DhCOL 的 cDNA ORF 区全长,并对其构建植物表达载体,拟通过转基因技术和比较 16h/8h(昼/夜)和 8h/16h(昼/夜)不同光周期处理下 DhCOL 和DhGI1 的相对表达对其进行了功能 验证。研究结果如下:
1、DhCOL 基因全长为 834bp,编码的蛋白质为核定位不稳定蛋白,由 277 个氨基酸组成,分子量为 29352.7,理论等电点为 5.34,含有两个锌指-B-box 结 构域和一个 CCT 结构域,聚类分析表明该基因与蝴蝶兰杂交种的 PhalCOL,文 心兰的 OnCOL,石斛的 DlCOL,建兰的 CeCOL 有着高度的同源性,分别为: 98%,84%,83%,80%;
2、荧光定量结果显示:DhCOL 在长日照下,几乎以 8h 为周期节律性表达, 在短日下均在光暗转换过渡时期有一个表达高峰;DhGI1 无论在长日还是短日下 均在在光期 7h 时,表达量较高,在暗期转向光期时表达量最低,且其表达量均 高于 DhCOL。在各生长阶段,DhCOL 和 DhGI1 在长日照下的表达均较高,且 均在花梗抽出小于 4cm 时表达较高;在短日照下 DhGI1 花梗抽出 7cm-10cm 时 表达量最高。DhGI1 和 DhCOL 均在较大的花苞中表达量较高,且在长日照下比 在短日照下表达量高。各组织中 DhCOL 在长日照下的表达量均比短日照高,且 DhCOL 和 DhGI1 均在茎中的表达量最高;DhGI1 在短日照下在茎和花中的表达 高于长日照,但在其他组织中的表达均低于长日照。在花部各器官中 DhCOL 和 DhGI1 在长日照下均在唇瓣中表达量较高,在短日照下均在花粉块中表达量较 高。
3、以 pCAMBIA1301 为植物表达载体,构建的 PC1301-DhCOL 正向表达载 体经酶切和测序验证正确;采用蘸花法浸染拟南芥,并利用潮霉素筛选出了纯合 子,且检测了其在基因组水平和转录水平上目的基因的表达,表型显示:DhCO L 的过量表达延迟了拟南芥的抽薹时间,且在整个生长阶段并未开花和结果,推 测 DhCOL 可能参与了朵丽蝶兰的成花网络途径。
关键词:朵丽蝶兰,DhCOL,荧光定量 PCR,光周期途径
I
ABSTRACT
Doritaenopsis , an intergeneric hybrid general designation between Phalaenopsis and Doritis, compared with the traditional Phalaenopsis orchid, which has higher ornamental value and economic value. The full-length cDNA open reading frame (ORF) region of DhCOL was cloned from
Doritaenopsis‘Tinny Tender’. And the plant expression vector of DhCOL was constructed and
transformed into Arabidopsis thaliana to verify its functions. Besides, DhCOL and DhGI1 relat
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